第1个回答 2022-06-07
细胞铺皿，，然后收蛋白
先把培养基液吸走
Pbs洗培养皿。 1*pbs
细胞刮。
用枪冲，然后吸到小瓶里
离心。（离心机要提前开） 液体一样多。配平。
3000转，5min （裂解细胞成碎片） 看细胞的状态，太快容易碎
把水抽出来（细针管）
（最近用放-20度，以后用放-80）
加80ul裂解液（990ulRIPA+10ulPMSF分装）（是细胞量的5~6倍），吹悬，冰上裂解30min
超声破碎仪：破碎细胞。 先用水洗一下头，再用纸擦一下，每个ep管里的细胞破碎2次，一直在冰上 20min
离心，把蛋白离心出来：12000转，20min
取上清，放入新ep管（部分pr定量，部分继续下面步骤）
加5*loading buffer：是提取的蛋白样量的1/4。
煮样：100°，5min，用板子压着ep管（-20保存）
上样前再煮2min
提的是细胞总蛋白，用特异性抗体识别抗原
western 设置的3组对照：正常癌细胞，空转组，敲低组