如何进行动物和植物组织total RNA的提取及cDNA文库制备的试剂准备？

Question

如题所述

Answer 1

为了提取cDNA文库Total RNA，准备工作至关重要。首先，玻璃制品如研钵、移液管等需用锡纸包裹口部，放入180℃烤箱烤6小时，塑料制品则需浸泡DEPC水后高压灭菌。常用的试剂有：

DEPC水: 1000ml去离子水加100ul DEPC，静置后高压灭菌。
0.78M柠檬酸钠: 22.94g三水合柠檬酸钠加DEPC水定容至100ml，室温备用。
10%肌氨酸钠: 10g加DEPC水定容至100ml，室温备用。
变性裂解液: 按照配方调制后，临用前加入β-巯基乙醇至1%（v/v）。
还有2M、10x MOPS、4x RNA Loading buffer等，具体步骤中需按需配制。

对于动物组织提取，需根据组织量和变性裂解液量进行操作，步骤包括匀浆、加入乙酸钠、酚/氯仿处理、离心和沉淀RNA。植物组织提取则涉及研磨、TRIzol Reagent提取，以及后续的沉淀、洗涤和干燥步骤。每一步骤都需在特定的温度和条件下进行，确保RNA的质量和纯度。最后，提取的RNA可用于测定OD值和电泳，剩余部分需冷藏保存。

扩展资料

以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。