LC-MS如何提高覆盖率?LC-MS数据经软件分析后与数据库中的相应蛋白覆盖率在20%以下,这正常么?如何提高

如题所述

高性能液相色谱是较高的精度,和分离的范围广泛的快速分离法,它是破坏性的小的结构的化合物,适合的有机分子和生物分子的分离。其他分析方法所无法比拟的质谱灵敏度,分析结构的未知化合物的定性非常准确的,低标准样品的要求。质谱和气相相关联,如GC / MS和高效液相色谱法,如HPLC / MS。色谱和质谱的灵敏度相当不错的色谱分离 - 质谱联用,可以使用为喷射系统,质谱作为色谱鉴定仪速度快速分离和广泛的应用。色谱 - 质谱联用微量有机混合物的分析是最好的工具。
快速发展后,1970年,质谱 - 质谱法(的质量separetion质谱表征)。这种方法允许,母离子进一步开裂,导致在裂化过程和分子结构,通常被称为串联质谱,二维质谱,和顺序质谱。
我们知道,质谱分析的物质的基础上,建立的电离达到的目的的分析,根据与强度的荷质比分离离子通过测量离子峰。所形成的离子通过汽化的样品经色谱分离后的电场和磁场的综合作用下电离,根据质量数的大小和数量的顺序排列的光谱被记录的费用的比率。常见的MS纵轴离子信号强度,横轴是核质比的离子。中通常使用的液体色谱质谱ESI和APCI离子源中,我们使用的是ESI。 ESI是??比APCI软的电离的电离程度小,APCI大的应用范围,只有一小部分可以不使有机分子ESI,APCI辅助解决问题。一般使用ESI和APCI更广泛的应用范围比ESI和APCI。
ESI和APCI通常会产生(M + H)+或(MH) - 分子离子源参数调整简单,使用方便,灵敏度高的仪器。 APCI源,不足之处是有限的结构信息,样品易发生热裂解,低质量的基线噪音。 ESI通常只的分子离子峰,和它们的混合物,可以直接测量极性化合物是热不稳定的,并可以被测量。它易于形成的生物大分子,如蛋白质和DNA的多电荷离子的特性,可以进行分析的一部分,得到的化合物的结构,通过调整控制离子碎片离子源电压(源内CID) 。
当然了,有机质谱也有其自身的局限性。大多数的有机分子的异构体,和质谱在立体化学方面的辨别能力;色谱重复性需要严格控制经营状况略差,不能直接NMR,IR等手中,并要求负责人;质谱离子源的记忆效应,操作是非常复杂的,然而,气相色谱 - 质谱法在天然产物的分析[1],药物代谢,结合确定的对象(如苯丙酮尿症PKU)[2],药物合成监测(莱克多巴胺)[ 3]有着重要的应用。耶鲁大学教授J.Fenn和其他ESI-MS首次出版于1984年的研究,并于1988年成功地进行了蛋白质的分析。
先天性的疾病中有很大一部分的先天性代谢性疾病,多百种医学的进步已经知道了。这些疾病,而不是致命的,但儿童的智力和身体可能会导致老年痴呆症,不完整和畸形的家庭带来沉重的负担,社会和国家。目前,有30余种代谢性疾病,遗传性疾病,如氨基酸代谢障碍包括同构的高胱氨酸尿症瓜氨酸酪氨酸,超苯丙氨酸血症精氨酸酶缺乏症,精氨琥珀酸尿症和各种超蛋氨酸血症高脂血症,短链长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCAD和LCAD),??异高脂血症,甲基丙二酸血症丙酸血症,戊二酸血症,以及各种其他有机酸代谢障碍性疾病,因此可以采用LC / MS / MS的临床检测[4 。
我们知道,确保药品杂质的质量控制检查和限制,使用LC / MS / MS可以很容易地药物监测的一个重要方面。萨科建立不同批次的抗癌药物DuP941的LC / MS / MS图谱质量控制的目的; Rourick,建立药品杂质,降解产品采用LC / MS / MS功能鉴定头孢菌素头孢羟氨苄结构鉴定方法。使用LC / MS / MS分析的化学家是一个挑战在体内药物分析中也显示了极大的优越性。金城武一直使用固相微萃取和液相色谱分离MS / MS检测的血液和尿液中的11个增值吩噻嗪类药物进行了分析。黄进行微透析-LC/MS/MS,生物体内微透析探针插入颈内动脉的动物,实时了解褪黑激素在人体内的生化过程,代谢。 LC / MS / MS也能识别很多药,体液中,据报道,在许多文献[5,6]。的
LC / MS / MS分析也用于测定分子量在生物技术[7]。对于精确的质量测定的蛋白质的分子量为10,000或更多离子喷涂技术是常规分析。研究离子喷雾测定甲硫酸 - 人类生长激素(MET-HGH)的分子量至22,256.32±0.44Dr与实际22,256.2博士差异计算的分子量是小。聚丙烯酰胺凝胶电泳,蔗糖密度梯度离心等经典蛋白质分子量的测定比分析时间短,样品消耗少,快速,准确的测定。有研究人员使用LC / MS / MS进行分析的DNA药物结合蛋白和金属离子配位[8]。
司法鉴定LC / MS / MS是一个强大的工具,也是一种药物检测[9]。 Soenoff血的新生婴儿的,的苯甲酰Aikangning确凿的证据,以确定出生的婴儿,对涉嫌吸毒者。 clauwean头发可卡因和其代谢产物通过LC / MS / MS和LC /荧光检测,得到的结果是一致的,并仍然可以被进行,在非常低的浓度,在MS / MS扫描。王可卡因及其代谢物的的CID来源和标准的深刻巨大的成功的条件的变化开裂机理。
LC / MS / MS在食品检测是不可低估的。例如氯霉素蜂蜜中的LC / MS / MS分析,孔雀石绿在鱼LC / MS / MS,LC / MS / MS分析的各种抗生素,动物组织,19β-肾上腺素兴奋剂检测苏丹LC-MS/MS方法决心,水果和蔬菜,同时检测100种农药及其代谢产物,油炸食品中丙烯酰胺的测定。动物源性食品中硝基呋喃国际贸易的必检项目硝基呋喃类药物呋喃唑酮,呋喃酮,呋喃西林,呋喃妥因大肠杆菌和沙门氏菌肠胃疾病的治疗和预防的哺乳动物。研究发现,呋喃西林,呋喃唑酮及其代谢产物有致癌作用[10]。
1995年,欧盟禁止在食用动物中使用硝基呋喃类药物,2002年,中国颁布了一项禁令,禁止类兽药的使用[11]。硝基呋喃类药物代谢快和对光敏感的,但在动物体的母体化合物,和产品的迅速下降到低于检测极限,但其代谢产物的蛋白质结合物可能会在很长一段时间的形式[12留在体内, 13]。
国家硝基呋喃代谢物的指示硝基呋喃类药物残留的标记。彭涛高效液相色谱/串联质谱法(LC / MS / MS)测定奶粉呋喃唑酮,呋喃酮,呋喃西林,呋喃妥因代谢物的方法。宽实证研究[14,15]。
要求定性和定量随着科学和技术的发展,日益增长的需求分析现场仪表,制药行业的杂质含量为0.1%,增加选择性和灵敏度的检测更多的化合物,提高了??分析的基础上,复合类型,也是一个挑战,我们的分析师。 HPLC / MS / MS与LC强大的分离分析能力和敏感MS鉴定和结构鉴定提供可靠,准确的分子量和结构信息,以简化测试程序,样品制备时间和节省时间分析的能力,作为一个最重要的分离和鉴定方法,在分析化学领域发挥更重要的作用
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