FISH检测主要是检测基因或序列的染色体定位,也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。
FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
扩展资料:
原理:
将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。
缺点:
不能达到100%杂交,特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。
FISH技术作为非放射性检测体系,具有以下优点:
1、荧光试剂和探针经济、安全;
2、探针稳定,一次标记后可在两年内使用;
3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;
4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;
5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;
6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。
参考资料来源:百度百科——FISH技术
以用来对核酸进行检测和定位。荧光标记的核酸探针只和具有高度相似性的核酸杂合,可用于染色体上基因的定位,或在分子生态学中用来标记不同分类细菌或古菌中的核糖体RNA。
技术原理
荧光原位杂交技术的基本原理是如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性—退火—复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。
技术要点
1、FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色体,也可以是间期细胞。
2、生物素、地高辛、Dinitrophenyl (DNP)、Ami-noacetyl Fluorine(AAF)等均可用于探针标记。近年来,大片段的DNA探针(100-400 kb)已被研制出来,由于控针较长,故可将荧光物质直接标记在核苷酸上,使杂交过程进一步简化,而且杂交信号更强。
3、荧光原位杂交可以通过CCD(电荷耦合器件)相机系统或激光共聚焦扫描成像系统将摄取的信号存储在计算机中,经过软件特殊处理后显示在屏幕上。
使用数码成像相机系统或CCD相机系统,灰度图像被拍摄几次并存储在计算机中,接下来通过一些人造色,软件系统接收获得的示例图像,经过软件的综合处理,最后以多色图像显示出来。此外,在G-带状染色体被75酒精或甲醇褪色后,FISH可以更清楚地识别易位。
医疗应用
通常,发育障碍儿童的父母希望在选择要另一个孩子之前更多地了解他们孩子的状况。这些问题可以通过分析父母和孩子的 DNA 来解决。在不了解儿童发育障碍的情况下,可以使用 FISH 和细胞遗传学技术潜在地确定其原因。
使用 FISH 诊断的疾病示例包括Prader-Willi 综合征、Angelman 综合征、22q13 缺失综合征、慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、Cri-du-chat、Velocardiofacial 综合征和唐氏综合症。
精子细胞FISH 适用于体细胞或减数分裂核型异常以及少精子症的男性,因为大约 50% 的少精子症男性的精子染色体异常率增加。对染色体 21、X 和 Y 的分析足以识别处于危险中的少精子症个体。
在医学上,FISH 可用于形成诊断、评估预后或评估疾病(如癌症)的缓解情况。然后可以专门定制治疗。由于细微的染色体特征,涉及中期染色体分析的传统检查通常无法识别区分一种疾病与另一种疾病的特征;FISH 可以阐明这些差异。
以上内容参考 百度百科-FISH技术
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