紫外吸收法测定蛋白质浓度的基本原理是什么？

Question

如题所述

Answer 1

紫外吸收法测定蛋白质浓度的基本原理是：蛋白质分子中的芳香氨基酸残基（主要是色氨酸和酪氨酸）和一些其他的结构元素可以吸收紫外光（特别是在280nm附近的波长）。当紫外光通过含有蛋白质的溶液时，蛋白质分子会吸收部分紫外光。通过测量溶液的吸光度（Absorbance，A），可以评估蛋白质的浓度。根据比尔定律（Beer-Lambert定律），吸光度与蛋白质的浓度成正比。
具体来说，比尔定律描述为：A=ε×c×l 其中：
A 是吸光度。
ε 是摩尔吸光系数，表示特定波长下，特定物质每摩尔吸收的光量。
c 是物质的浓度（摩尔/升）。
l 是光通过的样品的长度（通常是1厘米）。

百泰派克生物科技——生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

Answer 2

原理：蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm波长吸收值大小来测定蛋白质含量。
优点：
1.
快速
2.
对蛋白质无破坏性
缺点：
1.
不是严格的定量方法。
因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。
另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）
2.
核酸可引起强烈干扰

Answer 3

由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据。
本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，多用于纯化之蛋白质的微量测定。主要缺点：1.当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时，则产生—定误差（故要准确定量，必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较，或且已经知道其消光系数作为参考），2.
不少杂质在280nm波长下也有—定吸收能力，可能发生干扰。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。然而核酸的最大吸收峰是在260nm，因此溶液中同时存在核酸(嘌呤、嘧啶等吸收紫外线)时，必须同时测定OD260nm与OD280nm。混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值，，然后根据两种波长的吸收度的比值，通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量，再按公式推算蛋白质含量。