你好，我们现在准备做菌落pcr,可以问一下你pcr时需不需要加石蜡油这种东西？还是其他物质啊。

Question

如题所述

Answer 1

不需要。但是菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂，DNA变性。所以最好选用HotStart PCR，一举两得。追问

那不是要先提取DNA吗？菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂是在pcr仪里直接加热吗？那为什么有些资料里说pcr时需要加石蜡油呢？是不是如果仪器可以那个从顶部加热就不用加石蜡油？

追答

你看的资料一定很老了。老旧的机器顶盖没有加热功能，所以要在PCR反应液的顶部加石蜡油，以防溶液蒸发。现在的机器一般都可以加热顶盖，所以不再用石蜡油了。

加热破裂菌体可以和PCR在一起进行

Answer 2

楼上的回答都比较笼统。
首先石蜡油现在已经极少用了。对于做E.coli等原核的菌落PCR不需要预先破菌，在95℃*5min的预变性过程中就能基本上破裂，让DNA释放出来。
但是在做酵母或者其他真核菌落PCR时，仅仅95度5min的预变性不足以裂解，所以一般我们会用一种叫做Lyse-N-Go的试剂，只要成分是低浓度NaOH，裂解细胞，然后做Hot-start PCR，其实直接用低浓度NaOH裂解也可以实现，我已经验证过有效。lyse-n-go是Thermo Scietific公司的专利，具体protocol你去他们页面查。http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=06010490

Answer 3

以前是要加矿物油，现在的PCR基本不需要了。
已多年的经验来看：你的热盖PCR仪，再加上又是菌做模板，P起来是很简单的，此外，PCR的预变性过程也足够裂解菌，不须什么特别准备。

Answer 4

要加。不然就蒸干了，还会导致污染~~~追问

但是我听说那个pcr仪，只要是盖子可以加热的，就不需要加石蜡，主要是pcr仪器的问题吗？是不是要加体系同等体积的石蜡油啊？

追答

对，你说的是热盖是吧~~~看情况吧~~~如果你们的pcr仪密封好，还是可以的~~~但是体系小的话还是可以加一下的，反正也不麻烦~~~有的机子用太久了可能密封就不好了~~~你看具体情况做吧~~~

Answer 5

加不加要根据PCR是否有热盖功能，有这个功能就不需要加。菌落PCR就是为了简便的看看有没有目的基因存在，不用考虑过多，PCR基本成分都有就ok