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    • 我的细菌PCR能扩出片段，但是却提不出质粒来，换了两个试剂盒也提不出来，这是怎么回事啊？请专家指教。

    如题所述

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    推荐答案   2011-08-10
    可能是质粒根本没进去啊 P出来的也许是引模二聚体 也可能是你引物特异性不好扩增了细菌的基因组片段
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    第1个回答  2011-08-10
    可能质粒在细菌外
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    菌液PCR是阳性,却提不出来阳性质粒,求助答：这个我也遇到过，可能你的菌液PCR是假阳性。建议：1.菌落PCR鉴定推荐使用通用引物，因为不管是M13，RVM也好，这些东西从细菌里面扩东西出来的可能性是零，因为那些通用引物一般都不会是从细菌来的，像那几个T载体用的通用引物肯定不可能从细菌里面扩东西出来。2.一定要做阴性对照。希望能够帮到你 ...
    菌液PCR有条带,但提不出质粒,为什么?答：如果你做得是质粒的构建，我想根本的原因是没有连接上，那得重新做，考虑连接的问题。对于你的那个5天得菌液，原则上说菌液放久了，质粒可能会丢失，你可以重新再在抗性培养基里（如果有抗性的话）摇一下。如果没连接好的话估计也提不出质粒。慢慢来，共勉！
    在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒答：菌液pcr明显假阳性么，这种情况遇到的太多了。当然不能直接诱导表达，建议你在质粒上设计forward primer，连接片段上设计reverse primer，这样就可以排除假阳性了。重做一次克隆也快，你小心点，重头来遍就可以了，不用急，载体回收好，排除质粒污染，少酶切点，载体一点点就够了，时间长点，NEB的3h，...
    为什么摇出菌了但抽不出质粒答：1.挑取的可能为假阳性：有检测引物么，先做个菌落pcr，再扩大培养。2.培养基抗性再次确认下 3.可能染杂菌 4.在提取质粒的裂解步骤时，溶液呈液体状态还是凝胶状态，凝胶状态就是没有裂解开。这个可能是菌种摇老了，或者染杂菌，或者裂解液失效。
    ...菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒?请教高手!答：1 做空白对照，看是否你的PCR体系有污染。2 请考察pPICZa是否是严谨质粒。如果是的话，请大提质粒，然后鉴定。
    pcr扩增出的片断正确但双酶切结果却偏大,不只是为什么??请高手指点...答：可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化。因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增。建议你做个测序。
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