蓝白斑筛选问题

当我进行 蓝白斑筛选的时候,没有完全的白斑, 只有一些白斑带一点的蓝色,请问这种现象是什么原因造成的?
多谢!

第1个回答  2011-08-04
那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢?

我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑。

没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功。

从连接产物,到菌种都排查一下吧!追问

“我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑”
这个我不能同意,因为我在将带蓝色的斑涂开以后,就会是大部分的斑是白色的,一些是蓝色的。
但单个的斑是由一个菌长起来的,为什么是蓝白的混合物呢。我挺不能理解的。

追答

你还很追根究底呢,这点比我好。不过你我情况可能不同, 我当时把那种菌做了菌液PCR,没有我的结果。然后我师兄告诉的。

根据你后续试验判断,可能是有的菌在生长过程中,发生了质粒的部分丢失。

那有可能是菌种容易发生突变,要么是那个质粒不够好。先换个菌液试试

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第2个回答  2011-08-04
有没有特别蓝的斑?

三种情况:
1. 全部自连 构建失败
2. 插入片段较小 并且读码框能匹配 使半乳糖苷酶仍具有活性
3. 最常见的情况:细菌养的时间长都会有蓝色 不过自连菌落的特别蓝 阳性的菌落培养时间长了微蓝。 我做蓝白筛基本是这种情况。 估计是大肠杆菌自身能表达有微弱的半乳糖苷酶活性追问

有一些特别蓝的斑。
你说的细菌养的时间太长是指多长,我的斑也就是过夜,而且其实是有一个斑是全白的,几个斑是带点蓝色的。 可能不是时间长的问题,也不是因为大肠杆菌能表达微弱的半乳糖苷酶。
还有没有其他的建议。谢谢

第3个回答  2011-08-04
可能是基因突变,还可能要看你使用的父本和母本
第4个回答  2021-01-27

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