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Western Blot转膜时胶和膜放反了有影响吗
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推荐答案 2015-06-29
那蛋白就都转到滤纸上去了，没有到膜上。你找点丽春红染染膜看看，估计膜上什么也没有哇。不用往下做了。
当然，如果你在膜上看到预染Marker了，还是值得再去尝试一下的。
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转膜时膜
和
胶
上都没了
答：
胶和膜放反了，酶失活了
。1、胶和膜放反了：在转印的过程中，胶和膜的位置颠倒了，蛋白就从胶上转移到缓冲液中，而不会到达膜上。对于标准的转印，凝胶应靠近三明治的负极，而膜对应正极。2、酶失活了：叠氮钠是辣根过氧化物酶的抑制剂。不要再HRP显色的Westernblot中使用任何含叠氮钠的试剂。...
wb条带中间有空白
答：
3、
胶和膜放反：胶和膜放反了，蛋白会从胶上转移到缓冲液中，无法到达膜上，导致出现空白区域
。在进行Westernblot时，要确保胶和膜的正确对应。
Western Blot转膜时胶和膜放反了有影响吗
答：
那蛋白就都转到滤纸上去了，没有到
膜
上。你找点丽春红染染膜看看，估计膜上什么也没有哇。不用往下做了。当然，如果你在膜上看到预染Marker了，还是值得再去尝试一下的。
做
western blot时
为什么
转膜
后膜上没有蛋白?
答：
还是用ponseau S （丽春红）给
膜
上的蛋白质显色看一下到底如何。另外膜上没有marker的话，
胶
上还看得到marker吗？如果还在胶上，那么蛋白质可能也还在胶上，可以改变电流和时间重做一遍。如果胶上膜上都没有，那搞不好就跟二楼说的一样，正负极接反，样品全跑到缓冲液里去了。。。
western blot
跑不出条带的原因有哪些
答：
Buffer一定要预冷，最好提前一天配好放4度；滤纸不要大过PVDF膜，防止短路；
胶
在负极，膜靠近正极，放入Tank前检查一遍会使你免以体会
放反
的痛心疾首；膜要标记好正反面；
转膜
过程中，经常过去看看，防止意外，如电泳仪接触不好。 顺带一提，步骤一样不一定成功的，有时候是操作不到位所致 ...
Western blot
实验技术及常见问题分析?
答：
也可以将两张
膜
叠在一起,再转移。 3最后显色时用 DAB好还是ECM好?答:DAB 有毒,但是比较灵敏,是HRP 最敏感的底物;ECM结果容易控制,但被催化时灵敏度差一点,但如果达到阀值,就特别灵敏,可以检测pg 级蛋白,具体可以根据你实验的情况。 4 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和
western blot
试验...
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转膜胶和膜放反了
western转膜胶的方向
转膜结束为什么胶上和膜上都有条带
Blot胶有正反吗
WB转膜时膜比胶大
转膜结束后胶上还有marker
胶裂了还能转膜吗
转膜胶正反面
转膜为什么膜上什么也没有
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