Wolfe等提出了田间直接测定法和室内测定法，后者又可分菌落计数法和孢子计数法
(1)田间直接测定:在田间暴露一组单基因鉴别品种幼苗，经一定时间后取回，保湿，使降落在叶片上的孢子萌发和侵入，在发病后测定每一个品种产生的病斑数，据此计算毒性频率以标准感病品种上的病斑数为计算的基数
(2)室内间接测定:有两种方法，第一种为病斑计数法，将所采集的混合病叶样本用沉降塔接种一套鉴别品种叶段，离体培养，发病后以各品种叶段上的病斑数与感病品种叶段的病斑数比较，计算毒性频率第二种方法为孢子计数法，用沉降塔接种盆栽幼苗或离体叶片，接种叶发病产孢后，洗脱孢子，配制孢子悬液，用血细胞计数板镜检计数孢子数目，换算单位叶面积产孢数，据以计算毒性频率
用上述方法，都可得到单个毒性因子单独出现的频率(实测值)，根据这一频率，可计算2个或多个因子组合的频率(理论值)各个鉴别品种上所得孢子，可用来再接种整套鉴别品种，计算各毒性因子频率，用此第二次测得的基因频率，可计算具有2个毒性因子的表型频率(实测值)，若再将每个品种产生的孢子，第三次接种整套鉴别品种，用所得结果，就可进一步估计具有3个毒性因子的频率(观测值)