提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度

如题所述

提取细胞RNA之后,为什么要测RNA浓度
1、提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解。
2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0。如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大,所以会使比值上升。RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数,看你的RNA是不是完整,质量好不好,太低就说明降解严重~~~ 其实提取RNA的条件没那么苛刻,在普通的通风橱里就可以操作,外源RNase的污染比较好消除,关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。 另外,相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差,而沙门菌提取效果就较好;所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取,然后浓缩。我提取的是大肠杆菌,摸索了好几种方法,最后确定也是qiagen 的kit提取,然后浓缩。 另外,有一种可以喷的液体,叫做RNase抑制剂,用于消除表面RNase的污染,在客观条件不是很好的时候很有效。
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