第1个回答 2011-05-17
摘要目的：探索建立等速电泳法测定头孢氨苄的方法。
方法：用带有电导和254 nm紫外检测器的毛细管等速电泳仪，在pH 8.9～10.0的电解质系统中测定头孢氨苄。
结果：将头孢氨苄、7ADCA和α-苯基甘氨酸进行了有效分离，测定头孢氨苄含量的线性范围为1～12 μg，r=0.999 8，平均回收率在98%～101%之间，RSD≤1.3%。
结论：方法简便，快速，准确度、精密度高，可排除α-苯基甘氨酸、7-ADCA和其它杂质的干扰，本法测定需要对照品。
头孢氨苄为抗生素类药，适用于咽喉炎、呼吸道感染、皮肤软组织感染等疾病。其测定方法有碘量法［1］、HPLC法［2］、分光光度法［3］等。药典规定的碘量法测定费时，且反应温度、pH、反应时间均需较严格控制，否则测定的平行误差较大［4］，并且合成头孢氨苄的中间产物7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)对该法也有干扰。本文应用等速电泳法(ITP)测定头孢氨苄的含量，并与碘量法［1］和非水滴定法［5］比较。实验表明，ITP法简便、快速，准确度、精密度高，并可同时定性检出α-苯基甘氨酸、7-ADCA和其它杂质。
1 仪器和试剂
LKB 2127 Tachophor，瑞典生产。
头孢氨苄标准品(含量为91.9%)、对照品7-ADCA和α-苯基甘氨酸均由中国药品生物制品检定所提供；头孢氨苄胶囊由汕头市化学制药厂生产；其它化学试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 碘量法测定
按文献［1］进行。
2.2 非水滴定法测定
取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取样品10～20 mg置于150 mL锥形瓶中，加入冰醋酸5 mL使其溶解，再加入氯仿15 mL，用0.01 mol.L-1的高氯酸标准溶液滴定，用结晶紫作指示剂，终点由紫色变成天蓝色，并作空白试验。
2.3 等速电泳法测定
2.3.1 电解质系统
前导液(LE)：0.01 mol.L-1盐酸-Amediol，pH 8.90(日本岛津原装)；尾随液(TE)：0.01 mol.L-1苯酚-氢氧化钡溶液，pH 10.0(日本岛津原装)。
2.3.2 操作参数
毛细管内径1 mm，长20 cm；迁移电流为100 μA→50 μA；纸速为2 cm*min-1；电导检测器(PGD)及其微分讯号(DIFF)和紫外检测器(UVD，254 nm)；分析时间15 min。
2.3.3 线性关系考察
(1)固定进样量而改变浓度：以去离子水准确配制浓度分别为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mg.mL-1的头孢氨苄标准品溶液，将此系列溶液，在上述操作系统下，进样5 μL；(2)固定浓度而改变进样量：取1.2 mg.mL-1浓度的样品分别进样1，2，4，6，8，10 μL。获得头孢氨苄区带长度X(cm)和其量Y(μg)的两组数据，以一元线性回归法分别计算线性方程，结果得到的线性方程很相近，说明在适当的浓度范围内，样品的区带长度仅与所进样品的绝对量有关，与样品的浓度无关，表明实验结果与ITP的基本原理相符。
3 结果与讨论
3.1 分离图谱
称取头孢氨苄标准品50 mg、7-ADCA 20 mg和α-苯基甘氨酸20 mg，用去离子水溶解，定容至50 mL，取混合溶液5 μL进样，在上述操作条件下获得分离图谱，见图1。从图可看出电导检测器(PGD)能将三组分很好地分离，但由于头孢氨苄和7-ADCA吸收254 nm的紫外光强度相同，均为β-内酰胺环中O=C-N=C-发色团所致［4］，因而UV检测器的信号显示头孢氨苄区带与7-ADCA区带连在一起，结成一矩形峰，见图1。因此定性定量分析头孢氨苄主要根据电导检测器及其微分信号进行。
图1 ITP法分离图
1. 7-ADCA 2.头孢氨苄 3.α-苯基甘氨酸
3.2 线性方程
综合2组数据获得的一元线性回归方程为：
Y=1.850 8X-0.4879 r=0.9998
结果表明线性范围在1～12 μg内，线性关系良好。
3.3 精密度试验
应用ITP法测定头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量，取装量差异项下的内容物，混匀，取约50 mg，精密称量，以去离子水溶解，定容至50 mL。每批样品各配制5份溶液，分别进样5 μL。共测定2批样品。平均含量分别为87.34%和84.62%，RSD分别为1.2%和1.3%，表明本法精密度较高。
3.4 准确度试验
取已测知含量为87.34%的头孢氨苄胶囊，取装量差异下的内容物，混匀，精密称取41.8 mg(再加入7-ADCA 10 mg和α-苯基甘氨酸10 mg)和41.2 mg各1份，分别加入1.0 mg.mL-1的头孢氨苄标准品溶液25 mL，再加入少量去离子水溶解，转移至50 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，得溶液A和B。分别取上述2种溶液，用等速电泳测定头孢氨苄含量，进行加样回收实验，结果溶液A平均回收率为100.1%，RSD为1.3%，n=5，进样量6 μL；溶液B进样量为8和10 μL，平均回收率分别为100.1%和98.20%，RSD分别为1.1%和1.3%，n=4。结果表明平均回收率在98%～101%之间，加与不加7-ADCA和α-苯基甘氨酸，其加样平均回收率很接近，可见共存物7-ADCA和α-苯基甘氨酸基本无干扰，本法准确度较高。
3.5 样品测定结果对照
将上述样品用碘量法和非水滴定法分别测定，并与ITP法对照，结果见表1，测定的精度非水滴定法最高，而ITP法与碘量法基本一致，然而ITP法一次进样量仅几微克，碘量法一次测定量为数毫克，可见ITP法精度是比较高的。从表1还可看出3种方法测定结果并无显著性差异。
表1 不同测定方法的结果对照(n=5)
方 法头孢氨苄含量/%RSD/%
ITP法87.341.2
碘量法88.071.4
非水滴定法87.210.6
作者单位：中南民族学院化学系 武汉430074
参考文献
1 中国药典.1995.二部：178
2 周明昊.高效液相色谱法测定头孢氨苄.药物分析杂志，1997，17(6)：407
3 杨晓平.双波长分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量.药物分析杂志，1986，6(5)：303
4 中国药典1990版药典注释.170
5 金世美主编.有机分析教程.第一版.北京：高等教育出版社，1992.272