血小板分离纯化技术的常用方法介绍

Question

如题所述

Answer 1

洗涤法
以5%EDTA抗凝的血样在室温下，以1500rpm/ 200g离心12分钟，离心后上层为富血小板血浆，下层为压积白细胞和红细胞。将富血小板血浆转入塑料试管，3500rpm/1200g离心5min。弃去上层血浆，用血小板洗涤液洗涤3次。
梯度密度离心法
梯度密度离心法常用的分离液有Ficoll、Fercoll、戊糖等，Ficoll是最适合于分离细胞的分离液。Ficoll主要成分是一种合成的蔗糖聚合物，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。分离时先将分层液置试管底层，然后将抗凝全血以PBS稀释叠加在分层液上面，水平式离心后，血小板因密度小而悬浮于上层，将上层液体吸出，用血小板洗涤液洗涤3次便可得到纯化血小板。
凝胶过滤
凝胶过滤，又称凝胶色谱、凝胶层析。该技术是建立在分子筛概念的基础上的。一般常用的材料有葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等。血小板纯化常用的是牛血清琼脂糖凝胶。该凝胶是一种交联的聚合物，具有网络结构。将分离出来的富血小板血浆铺加于凝胶表面。离心使其在凝胶柱中流滤。血小板只能沿凝胶颗粒间的空隙随溶剂流动，不能进入凝胶颗粒内部，故租滞作用小，流程短，流动速度快而先流出凝胶柱。血浆蛋白则渗入凝胶颗粒网内，故租滞作用大，移动速度慢而较迟流出凝胶柱，从而达到纯化血小板的目的。