培养基的常见培养基

如题所述

牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化钠0.5g,琼脂1.5g,水100ml
在烧杯内加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。
牛心培养基
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
根瘤菌培养基
葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.5g,碳酸钙3g,硫酸镁0.2g,酵母粉0.4琼脂20g,水1000ml,1%结晶紫溶液1ml。
先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。 淀粉硝酸盐培养基(高氏一号培养基)
可溶性淀粉2.0g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0.05g,硫酸镁0.05g,硫酸亚铁0.001g,琼脂2g,水100ml。
先把淀粉放在烧杯里,用5ml水调成糊状后,倒入95ml水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2-7.4,分装后灭菌,备用。
面粉琼脂培养基
面粉60g,琼脂20g,水1000ml
把面粉用水调成糊状,加水到500ml,放在文火上煮30分钟。另取500ml水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。 BG-11培养基
NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (柠檬酸 )0.006g,Ferric ammonium citrate(柠檬酸铁铵0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸馏水)919ml
SE培养基 NaNO3 0.25g K2HPO4 . 3H2O 0.075g MgSO4 . 7H2O 0.075g CaCl2 . 2H2O 0.025g KH2PO4 0.175g NaCl 0.025 Soil extract 40ml FeCl3·6H2O 0.005 Fe—EDTA 1ml A5 solution 1000× 1ml distilled water 958ml Soil Extract(土壤提取液)配置方法
取花园土未施过肥0.5kg置于烧杯或三角瓶中,加入蒸馏水1000毫升,瓶口用透气塞封口,在水浴中沸水加热2小时,冷却数小时,在无菌条件下过滤,取上清液,将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。土壤提取液保存在4ºC备用。
Composition of the A5 solution
Add to 100 ml of distilled water:(加入100ml 的蒸馏水) H3BO3 286 mg MnCl2 . 4H2O 181 mg ZnSO4 . 7H2O 22 mg CuSO4 . 5 H2O 7.9 mg (NH4)6Mo7O24 .4H2O 3.9 mg EDTA-Fe的配置方法:
将EDTA和FeCl3·6H2O分别溶于水和HCl(0.1N),混匀即可。 Na2EDTA 1g distilled water 50ml FeCl3·6H2O 81 mg HCl(0.1N) 50ml Pr培养基
Preparation: to 997 mL of glass-distilled water, add 1.0 g proteose peptone, 15.0 g agar, and the following stock solutions: working solution g/1000 mL H2O NaNO3 0.25 CaCl2. 2H2O 0.025 MgSO4. 7H2O 0.075 K2HPO4 0.075 KH2PO4 0.175 NaCl 0.025 A5 solution 1ml EDTA-Fe 1ml FeCl3 (0.05%) 1ml A5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。 萨市(Sabouraud’s)培养基
蛋白胨10g,琼脂20g,麦芽糖40g,水1000ml
先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40g麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮,取200g切成小块,加水1000ml,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10g琼脂,煮沸溶解后加糖20g(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2-7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
豆芽汁培养基
黄豆芽100g,琼脂15g,葡萄糖20g,水1000ml
洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000ml,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2-7.4,可用来培养细菌和放线菌。
豌豆琼脂培养基
豌豆80粒,琼脂5g,水200ml
取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。 马铃薯-蔗糖-琼脂培养基
20%马铃薯煮汁1000ml,蔗糖20g,琼脂18g
把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200g,加水1000ml,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000ml,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。
综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁1000ml,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,葡萄糖20g,维生素10mg,琼脂18g
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽。
CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化。
愈伤组织诱导培养基制备
以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0。加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。
烟草叶片愈伤组织诱导取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种5小片,一共接种6瓶。接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶)。观察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率。
器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22℃条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况。
愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。具体情况见表一中所示。6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发生污染,但诱导率几乎各不相同。其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅,在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%。由于实验过程中,外植体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小。 RPMI1640培养基是一个全营养型培养基,广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养,如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。最初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。

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