细胞裂解液的主要成分

Question

如题所述

Answer 1

1. 裂解液成分解析：
去垢剂是裂解液中的关键成分，其特点在于具有两亲性结构。去垢剂分子由亲水性的“头部”和疏水性的“尾部”组成，这种结构使得去垢剂能在水性环境中形成胶束。在较高浓度下，去垢剂的极性部分朝向水分子，而疏水部分则聚集在一起，形成一个以疏水核心为特征的稳定结构。这种特性使得去垢剂能够与蛋白质的疏水表面结合，形成蛋白质-去垢剂复合物。根据亲水基团的不同，去垢剂可分为阴/阳离子型、非离子型和两性型。
- 阴/阳离子型去垢剂：作用较强，可能会较大程度地改变蛋白质结构，其活性受pH、离子强度和反离子的性质等因素影响。
- 非离子型去垢剂：作用较温和，不会分离蛋白质-蛋白质键，因此蛋白质可以保持其天然结构和功能，不易变性。
- 两性去垢剂：相比离子型去垢剂，引起的蛋白质变性较少；相比非离子型去垢剂，能更有效地破坏蛋白质-蛋白质键并减少聚集。
2. 裂解液的种类及其特点：
- NP40裂解液：
- 主要成分：50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40。
- 概述：NP-40是一种温和的非离子型去垢剂，1%的浓度足以破坏细胞膜，对核膜的破坏作用较弱，结合特定缓冲液可用于提取细胞浆蛋白。NP-40与蛋白质结合能力强，能防止分子间的疏水相互作用，确保蛋白质充分溶解并保持结构稳定。
- 用途：适用于常规的Western、IP和co-IP以及ELISA实验。本实验室提取核蛋白时，由于需要裂解细胞核膜，因此WB实验使用1% NP40+0.1% SDS（可能导致蛋白变形），IP/pull down实验则使用1% NP40+超声（以保留蛋白结构）。
- SDS裂解液：
- 主要成分：50mM Tris (pH8.1)，1% SDS。
- 概述：SDS是一种较强的细胞组织裂解液，能够裂解核膜。在SDS-PAGE电泳中，SDS能够打开蛋白质的氢键和疏水键，并与蛋白质分子结合，使所有蛋白质-SDS复合物带上相同的电荷，且电荷密度远超过蛋白质原有的电荷，从而掩盖了蛋白质间的电荷差异，使得电泳迁移率仅取决于分子的大小。
- 用途：适用于常规Western、ChIP等实验。建议参考碧云天的裂解液配置指南。