MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒有哪些注意事项？

Question

如题所述

Answer 1

M T T 可以被线粒体内的些脱氢酶还原生结晶状的深紫色产物f o r m a Z a n。在特定溶训存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过琚杯仪可以测定490n m波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高:细胞毒性越大，则吸光度越低使用说明:
1.收集对数期细胞，调整细胞悬浮液浓度，分于96孔构，每孔180u1，3000一10000细胞/孔。
2.置 37'C、 5%C O2 温箱培养使细胞贴壁，培养 6-24 小时。
3.加入适当浓度的受试化合物，继续培养适当时间。
4.小心吸去上清，加入90u1 新鲜培养液，再加入 10u1 M T T溶液，继续培养 4 H。
5.然后吸掉上清，每孔加入 110u1 F o r m a z a n 溶液，置摇床上低速振荡 10 m i n，使结晶物充分溶解。在酶联免疫柃测仪 490 n m 处测量各孔的吸光值。
6.同时设置调零孔(培养基、M TT、 F o r m a z a n溶解液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、M T T、F orm az a n溶解液)，每组设定 3 复孔。
注意事项
1.由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加 P B S，水或培养液，另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，缓解蒸发
2.M T T 溶液方黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。F o r m az a n 溶解液结冻或产生沉淀时可以 37'C 水溶孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂:
12100 D M E M(H)
31800 R P Ml M Edi u m 1640
24800 通用细胞冻存液 S o1a r b i o
P1020 1x P B S ， P H7. 2-7. 4 ， 0.01M
H1020 H a n K s ， 含钙镁， 含酚红
T1300胰蛋白酶一 ED T A 消化液 (0.25%)不含酚红
H1095 1M H e p e s 溶液 (P H7.2-7. 4，无菌)
P1400 青链霉素混合液(100x)

Answer 2

这是我在absin看到的：
1、由于使用96孔板进行检测，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2、若所用受试化合物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。
3、Formazan的生成不仅与活细胞数成正比，也受作用时间的影响，因此样品较多时测定的结果可能随时间而变。
4、本品含有致癌物质，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
5、本产品只用于科研，不可应用于临床或诊断。本回答被提问者采纳