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¶è£è§£é常æ¯æ¯è¾æ¸©åçæ¹æ³,é常ä¼å¾å°ä½¿DNA æè£.è¿ä¸¤ç§æ¹æ³ï¼å
æ¬SDS å溶èé
¶å¤ççï¼æå纯åDNAä¸å¸¸ç¨çæ¹æ³.æºæ¢°è£è§£å¯ä»¥æ´åä¸çè£è§£ç»è,ååå¦è£è§£ç¸æ¯,æºæ¢°å¤çå
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¨é¢çè£è§£ç»è,ä½ä¹ä¼é æDNA çæè£.
ä¸ãæºæ¢°è£è§£æ³ä¸»è¦æ以ä¸ä¸¤ä¸ï¼
1ï¼çä¼å
ï¼Thermal shockï¼,æ¢åå¤å»æº¶æ³,æ¯ä¸ç§å¸¸ç¨çæºæ¢°è£è§£æ¹å¼æ¯,é常ç±å·å»å解å»ä¸¤é¨åç»æï¼freezing and thawingï¼,.åçï¼ç±äºç»èå
å°ç²å½¢æåå©ä½ç»è液ççæµåº¦å¢é«å¼èµ·æº¶è,使ç»èç»æç ´ç¢.å·å»é常å¨æ¶²æ°®æ-20°Cå°ä¸è¿è¡,解å»å¯ä»¥å¨37ã50ã65 æ100âæ°´æµ´ä¸è¿çä¼å
æ¯åå¦è£è§£æ¸©å,ä½æ¯å¾ææ,æèµæ表æç¨çä¼å
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¶ä¸SDSçæ¹æ³è·å¾äº90%çç»èè£è§£ç.
2ï¼è¶
声波å¤çï¼Ultrasonicationï¼æ¢å©ç¨è¶
声å ççæ¹æ³,æç»èç ´ç¢.ä½è¿ç§å¤çä¼å¯¼è´DNA çæè£,æ以å çä¸å®è¿å§ç,è¦è®¾å®å¥½è¶
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¶çæ´»æ§.bead-beating ä¹æ¯å¸¸ç¨çæºæ¢°å¤çæ¹å¼,ææ¥éæåºbead-beating æ¯çä¼å
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主è¦æ¯è£è§£æ¶²å¤çæ³,ç»èè£è§£æ¶²ç主è¦ç®çæ以ä¸å ç§ï¼ï¼1ï¼å©ç¨å»æ±¡åç ´åèè´¨åååå±,ç ´è£ç»èï¼ï¼2ï¼æº¶è§£èç½ï¼ï¼3ï¼èç½åæ§ä½¿å
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¸ï¼å¦ææ们çç®çæ¯èç½,é£è¦æ ¹æ®èç½çä½ç½®ãç¹æ§çå ç´ èèè£è§£æ¶²,å¨æåèç½å,åæ ¹æ®å®éªéè¦å¤æ§èç½ç.以ä¸æ¯ç»èè£è§£ä¸å¸¸ç¨è¯ååå
¶ä½ç¨ï¼
50 mM Tris-HCl pH 7.4ï¼ç¼å²ä½ç³»ï¼,150 mM NaClï¼çæ¸ä½ç³»ï¼,1 mM PMSF ï¼å¼ºå¤§çèç½é
¶æå¶åï¼,1 mM EDTAï¼åæ§åå稳å®åï¼,5 μg/ml Aprotininï¼èç½é
¶æå¶åï¼,5 μg/ml Leupeptinï¼èç½é
¶æå¶åï¼,1% Triton x-100ï¼ç ´åç»èï¼,1% Sodium deoxycholateï¼ä¸åº¦åæ§ååèç½æº¶è§£åï¼,0.1% SDSï¼å¼ºåæ§ååèç½æº¶è§£åï¼.7M å°¿ç´ ,2Mç¡«è²(å¯ä»¥æé«èèç½çè解ï¼,èç½é
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