请问各位大侠,我的蛋白质酶解液(原液)尚且可以通过SDS-page电泳跑出条带,可为什么酶解液除盐再通过柱层析(用0.02N pH7.0的NaH2PO4和Na2HPO4缓冲液洗脱过柱)纯化后却跑不出电泳条带了呢?快毕业了,请各位救我!!!谢谢大家啊!:~):~):~)大家能说说样品中会有哪些因素影响SDS_PAGE的吗?谢谢大家了!痛哭流涕。。,
谢谢 “lcy19712008”和“我来煮稀饭”的回答。
1,我就用普通的透析袋除盐,再用聚乙二醇-2000浓缩,凝胶层析为交联葡聚糖凝胶SephadexG - 25型,(一般已知小分子蛋白质多肽可选用SephadexG<50。而由于目的蛋白(多肽)含盐量比较高,SephadexG – 25又可用于蛋白质脱盐,为了使脱盐效果更加理想,因此选用SephadexG – 25用于目的多肽的初步分离。)
2,我不是表达的蛋白质,而是抽提的蛋白再纯化测其生物活性用的。
不知道哪一步出问题了,原液可以跑出来,纯化就出不来了。可是纯化液体却表现出了蛋白质的性质,因此我认为可能是纯化液中的某些化学物质阻碍了我电泳,可我分析不出来;谢谢你们为我思考,不知道还有其他建议没呢?请各位帮我分析,谢谢!