二者的区别有以下几点：
一、对应软件版本的不同
.xls文件扩展名对应的是Microsoft Office EXCEL 2003及以前的版本。
.xlsx文件扩展名对应的是Microsoft Office EXCEL 2007及后期的版本。
二、在核心结构上的区别：
.xls文件是一个特有的二进制格式，其核心结构是复合文档类型的结构。
.xlsx文件的核心结构是 XML 类型的结构，采用的是基于 XML 的压缩方式，使其占用的空间更小。
三、二者对于软件兼容方面的不同
.xls文件既可以用Office EXCEL 2003版本打开，也可以用Office EXCEL 2007及后期的版本打开。
.xlsx文件只能用Office EXCEL 2007及后期的版本打开，Office EXCEL 2003版本是使用不了.xlsx格式的文件的。如果要用Office EXCEL 2003版打开.xlsx文件，可以安装Office兼容性补丁包，通过应用兼容性补丁包，Office EXCEL 2003的用户可以打开、编辑、保存.xlsx格式的文档。
此兼容性补丁包也能结合Office Word Viewer 2003，Excel Viewer 2003和PowerPoint Viewer 2003使用来浏览用新格式保存的文件。
参考资料来源：百度百科-Microsoft Office Excel
参考资料来源：百度百科-xlsx
区别如下：
1、文件格式不同。xls 是一个特有的二进制格式，其核心结构是复合文档类型的结构，而 xlsx 的核心结构是 XML 类型的结构，采用的是基于 XML 的压缩方式，使其占用的空间更小。xlsx 中最后一个 x 的意义就在于此。
2、版本不同。xls是excel2003及以前版本生成的文件格式，而xlsx是excel2007及以后版本生成的文件格式。
3、兼容性不同。xlsx格式是向下兼容的，可兼容xls格式。
扩展资料：
XLS 就是 Microsoft Excel 工作表，是一种非常常用的电子表格格式。xls文件可以使用Microsoft Excel打开，另外微软为那些没有安装Excel的用户开发了专门的查看器Excel Viewer。
使用Microsoft Excel可以将XLS格式的表格转换为多种格式：XML表格、XML数据、网页、使用制表符分割的文本文件（*.txt）、使用逗号分隔的文本文件(*.csv)等。
xlsx是Microsoft Office EXCEL 2007/2010/2013/2016/2019文档的扩展名。xlsx是从Office2007开始使用的，是用新的基于XML的压缩文件格式取代了其目前专有的默认文件格式，在传统的文件名扩展名后面添加了字母x（即：docx取代doc、.xlsx取代xls等等），使其占用空间更小。
参考资料：百度百科-xls
参考资料：百度百科-xlsx
xlsx和xls都是excel文件名扩展名，xls是早期excel使用的，xlsx为后续excel版本才开始使用。主要有以下区别：
1、xls是excel 2007之前版本的使用的默认格式。xlsx是excel 2007之后的版本使用的默认格式，包括2007的版本。
2、XLSX格式的占用空间比XLS的小。xlsx是用新的基于XML的压缩文件格式取代了xls默认文件格式。
3、excel 2007之前的版本无法直接打开xlsx格式的，版本较低不兼容。但可通过安装office兼容性补丁包来实现打开编辑。
4、excel 2007之后的版本可以直接打开XLS、xlsx。软件是向下兼容的。如果要使低版本的也可以打开，可以在保存时选择excel 97-2003.xls格式的。
5、 xlsx格式的文件本质上是一个ZIP文件，将XLSX(或者XLSM)文件扩展名改为zip,用解压软件解压,可以看到OOXML格式的文件内容。
*.xlsx格式的保存起来，有时比*.xls格式的还省空间。同一个工作簿里能插入更多的工作表。本回答被提问者采纳