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为什么dna重组只筛选出白菌落
如题所述
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推荐答案 2010-05-29
你是用蓝白斑筛选体系吗?
一般白斑表示有目的基因插入lacZ,破坏其功能,而不能正常合成酶降解底物,从而不出现蓝斑。因此重组的载体一般LacZ的活性已被破坏,产生白斑,但是有时你插入的目的基因短,使得LacZ基因没有完全破坏的话,可能会出现淡蓝的斑。
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第1个回答 2010-05-29
DNA重组筛选菌落,要看你的目的了。
如使用具有蓝白斑筛选系统,其目的基因插入位点在lacZ内,重组转化后其破坏了启动子的完整性,转化阳性克隆菌落就不能产生蓝斑,此即为我们的目的白斑菌落。
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蓝白斑
筛选
中,
为什么白色菌落
不一定是
重组
子
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源
DNA
插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有
重组
质粒的细菌形成
白色菌落
。这种重组子的
筛选
,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转...
蓝
白筛选
的实验原理
答:
1)初步筛选载体质粒DNA pBS上带有Ampr 基因而外源片段上不带该基因,故转化受体菌后只有带有pBS
DNA的
转化子才能在含有Amp的LB平板上存活下来;而只带有自身环化的外源片段的转化子则不能存活。此为初步的抗性筛选。2)蓝
白筛选
当外源片段插入到pBS质粒的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失...
基因工程中蓝白斑
筛选
的原理是
什么
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源
DNA
插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有
重组
质粒的LacZ-细菌形成
白色菌落
。这种重组子的
筛选
,称为蓝白斑筛选。
蓝-白斑
筛选
概述
答:
在实验条件下,当使用诱导剂IPTG并伴随生色底物X-Gal时,LacZ+细菌会产生蓝色菌落,这使得它们在众多细菌中易于辨认。然而,引入外源
DNA
到质粒的多克隆位点后,通常会导致
重组
质粒的氨基端片段丧失α-互补能力,使得细菌形成
白色菌落
,即我们所说的蓝白斑。这种
筛选
过程是用于识别含有重组质粒的细菌。在蓝...
蓝
白筛选
实验原理
答:
进入第二阶段,即蓝
白筛选
,当外源片段插入到pBS质粒的多克隆位点后,可能导致读码框架发生改变,使得表达的蛋白功能丧失。这会导致
重组
质粒的转化子在生色诱导培养基上形成
白色菌落
,因为它们不能产生有α-互补能力的氨基酸片段,无法进行正常的代谢反应。然而,没有重组质粒的转化子则不同。它们在含有生...
蓝白斑
筛选
答:
当外源片段插入到载体的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失活, 产生的氨基酸片段失去α-互补能力, 因此在同样条件下含
重组
质粒的转化子在生色诱导培养基上
只能
形成
白色菌落
。在麦康凯培养基上,α-互补产生的Lac+细菌由于含β-半乳糖苷酶,能分解麦康凯培养基中的乳糖,产生乳酸,使pH下降,...
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