1.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式
均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。
1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。
1.3 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液
的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其
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混合均匀,制成1∶100的样品匀液。
1.4 按6.1.3 操作,制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或
吸头。
1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在
进行10倍递增稀释时,吸取1mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取
1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
1.6 及时将15mL~20mL冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱
中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
2 培养
2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ℃±1培养48h±2h。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h。
2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层
琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。
3 菌落计数
3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以
菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。
3.2 选取菌落数在30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU
的平板记录具体菌落数,大于300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的
平均数。
3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释
度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以
2,代表一个平板菌落数。
3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
具体步骤你可以参考 GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定