怎样鉴别蛋白质和抗生素

Question

如果一种细菌发酵液的无菌滤液对某种病原菌具有拮抗作用，现在想要知道滤液中起拮抗作用的因子是蛋白质还是抗生素，应该用什么方法来鉴别，重点是鉴别蛋白质和抗生素，谢谢
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Answer 1

首先，应该查阅文献，了解一下这"可能"是什么东西。有一些抗生素本身就是蛋白质，但也有的是有机小分子。

分两种情况：

一、如果确定这种抗生素不是蛋白质，而是有机小分子，比如青霉素，红霉素。

透析法：
蛋白质是大分子，不能透过高分子滤膜，而有机小分子抗生素可以。
那么，把样品用高分子滤膜透析就行了。有机分子能穿透透析膜，蛋白质不能。在充分透析后，测试透析袋内和透析袋外的两种溶液哪一种有了原滤液对病原菌的拮抗作用，就能知道是蛋白质还是有机小分子（抗生素）在发挥作用了。

此外，检测蛋白质的方法还有：

紫外分光光度法
pro及其降解产物的芳香环基 ，在紫外区内对某一波长具有一定的光选择吸收，在280nm下，光吸收与pro浓度（3~8mg/ml）成直线关系。但是一些抗生素也有芳香环基...如氨苄青霉素

水扬酸比色法：
原理： 样品中的pro经H2SO4消化转化为铵盐溶液后，在一定的酸度和温度下与水扬酸钠和次氯酸钠作用生成有颜色的化合物，可以在波长660nm处比色测定。但是一些抗生素也能消化出铵盐溶液...再举氨苄青霉素的例子。

Western Blot/ELISA法
如果能猜测是什么蛋白质，那么可以订购相应的抗体，用Western Blot或ELISA检测。

柱层析法
用柱子走层析，用紫外分光光度器监测吸光度值，同时用几种猜测的蛋白质分别作为对照过柱，看哪个和样品有相同的条带。

Western Blot和柱层析需要特殊的仪器，不一定每个实验室都有，我觉得还是透析法最简便易行，还直观可靠。

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二、如果你所说的抗生素本身也是蛋白质（如嗜盐菌素，大肠杆菌素）那更好办了。

订购一个大肠杆菌素（或其他对应抗生素）的抗体，跑个Western或者做个ELISA，就知道是不是了。

也可以柱层析看是不是和大肠杆菌素（或其他对应抗生素）标样同时出柱，不过这个方法的缺点是难以确定就是这种抗生素，因为有可能分子量相近。不如WB和ELISA直观。

Answer 2

这个问题需要那么复杂么？- -|||

首先蛋白质和抗生素本身就不是一对矛盾概念，抗生素就不能是蛋白质了？蛋白质就不能是抗生素了？

然后既然你说了滤液具有抑菌效果，那么你就已经可以断定含有“抗生素”，只不过你不知道这种“抗生素”的化学本质是什么。你可以用蛋白酶消化滤液后再检测抑菌效果，如果消化后抑菌效果明显减弱甚至消失，那么说明是蛋白质；如果不受蛋白酶影响，那就不是蛋白质。

Answer 3

我想可以试试离子交换柱层析法来测试。
凝胶电泳可以分离不同的大分子物质。先用紫外分光光度器分别测标准样的蛋白质和标准样的抗生素的光吸收值（一般可以查表查到），然后将标准样过柱，记住时间（两种物质的分子量不同，因此在不同的时间段被分离，大分子的先分离出，小分子的后分离出）此为对照实验
用你提取的滤液浓缩后过柱，然后在相应的时间段收集液体，然后测其吸光值，与上面的对照实验比较，即可得出是什么物质。
假如测得的两种物质都有，并且都是你猜测的蛋白质和抗生素的种类，可以先进行标记，然后互为对照实验：将两种物质分别加入相同种类的病原菌但不同的培养皿中，观察，哪种导致产生了拮抗作用，即为你想得到的结果。

Answer 4

蛋白质可以用双缩脲试剂鉴定。取滤液加双缩脲试剂A1ml，摇匀，加双缩脲试剂B4-5滴，震荡，出现紫色反应，说明成分是蛋白质。否则是抗生素

Answer 5

蛋白质和抗生素有明显的不同，我提供以下思路供你参考：
1.可以用有机溶剂处理发酵液，如果是蛋白质的话会沉淀变性从而失去活力，再用该有机溶剂提取液做拮抗试验，如果有拮抗作用，可能就是抗生素，相反可能就是蛋白质有拮抗作用。
2.用盐析法处理溶液，做拮抗试验，可以得出结果。