要测定蛋白质的等电点，一种常用的方法是采用平板等电聚焦技术。该方法基于蛋白质分子在特定环境下，如Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell这种仪器中，能够在连续且稳定的线性pH梯度中进行电泳。在此过程中，蛋白质并不单纯按照等电点的不同进行分离，而是根据其电荷特性在pH梯度中移动。
进行样品处理时，液体样本需满足浓度大于3毫克/毫升，且体积大于200微升的要求。固体样品则需要质量超过200微克。同时，样品的纯度应高于90%，含盐量需控制在30毫摩尔/升以下，以确保测试结果的准确性。此外，为了实验的顺利进行，蛋白质分子量通常需要大于1000Dalton，过小的分子量可能会影响染色固定效果。
然而，值得注意的是，实验结果可能会受到几个因素的影响。首先，如果蛋白质纯度不足，可能会影响等电点的准确测定。其次，过高的含盐量会干扰电泳过程，导致结果偏差。最后，如果蛋白质分子量过小，可能不足以在等电聚焦系统中稳定存在，从而影响染色的固定和观察。因此，在进行等电点测定时，确保样品的质量和条件至关重要。
由于蛋白质表面离子化侧链的存在，蛋白质带净电荷。由于这些侧链都是可以滴定的（titratable），对于每个蛋白都存在一个pH使它的表面净电荷为零即等电点。 英文缩写 pI