三个区分开来内容是：要把干部在推进改革中因缺乏经验、先行先试出现的失误和错误，同明知故犯的违纪违法行为区分开来；把上级尚无明确限制的探索性试验中的失误和错误，同上级明令禁止后依然我行我素的违纪违法行为区分开来；把为推动发展的无意过失，同为谋取私利的违纪违法行为区分开来。
2016年，提出“三个区分开来”，此后党的多个法规文件载入这一政治原则，并以制度规范加以固化。2020年，党中央印发了修订后的《中国共产党党员权利保障条例》，明确规定要把党员在推进改革中因缺乏经验、先行先试出现的失误错误，同明知故犯的违纪违法行为区分开来。
把尚无明确限制的探索性试验中的失误错误，同明令禁止后依然我行我素的违纪违法行为区分开来；把为推动发展的无意过失，同为谋取私利的违纪违法行为区分开来。
条例将适用范围拓展到全体党员，要求正确把握党员在工作中出现失误错误的性质和影响，给予实事求是、客观公正的处理，鼓励并保障党员干部担当作为。
落实好新时代党的组织路线
“三个区分开来”的适用对象覆盖所有党员，就是要求更好落实政治责任，严密党的组织体系，纯洁党的队伍，在全党形成优秀人才脱颖而出的有效机制。一是坚持好干部标准，完善选人用人机制。
党的各级组织和职能部门要积极推进干事创业担当作为的体制机制建设，旗帜鲜明为担当者担当、为负责者负责、为干事者撑腰。牢固树立重实干、重实绩的用人导向，把忠诚干净担当的干部大胆使用起来。
二是完善干部考核评价机制，营造良好环境。进一步细化实化激励党员干部担当作为的制度规章，用好数据统计功能。既大力选拔敢于担当、善于作为、实绩突出的干部，又宽容在先行先试、推进改革中出现失误错误的干部，大胆培养使用。
三是坚持学思用贯通、知信行统一，匡正干的导向，增强干的动力，形成干的合力。践行好党的群众路线，通过科学深入的调查研究摸清情况、找准问题、提实对策，减少决策失误和执行偏差。聚力解决“四个不纯”和“四风”隐形变异问题，鼓足党员干部干事创业的精气神。