很简单的一个问题，关于rna提取的...

Question

又是我啦，嘿嘿~现在得到您的帮助已经可以大概尝试开始提取的实验了（kit 提取），但为了做得准确还是想确认些事情，所以我又来请求帮助啦！提取的首个步骤中用研磨好的组织或细胞，这里是用了10mg组织，那么我是直接称量放在生理盐水中的组织10mg然后用细胞研磨器研磨？然后把研磨的全部（包括一些研磨不了的组织团块）直接放在ep管里准备加裂解液裂解？？还是将研磨完的东西离心用上清液（含有细胞的上清液）再放在ep管里加裂解液裂解？？

Answer 1

我只做过液氮研磨，不太清楚你们的细胞研磨器是啥...是匀浆器？按照他给的protocol的做法是先称10mg样品，放到1.5mL ep里，再加500mL LY，再匀浆，充分混合后取上清（他没说，但我觉得可以离心），然后上DNA柱。LY中要加入beta巯基乙醇，抑制RNase，否则RNA极易降解。我们做液氮研磨则是先取样品，研磨，研磨成粉之后称取合适的质量，然后加裂解液，充分混合后离心取上清。你看你们那里的条件选择合适的做法吧。