实时荧光定量PCR仪是一种强大的分子生物学技术，它通过监测PCR反应中的荧光信号变化，实时评估样品DNA的浓度。其核心概念是Ct值，即样品达到设定域值所需进行的循环次数。这个域值的设定至关重要，理想情况下，它应定位在指数期扩增效率最高的阶段，以确保数据的精确度和可重复性。
在实际操作中，如果同时对一系列已知浓度的标准品进行扩增，通过线性回归分析，可以得到一条标准曲线。这条曲线就像是一个工具，可以利用它对未知样品的Ct值进行转换，从而精确计算出样品中目标基因的原始浓度。这种方法的优势在于，它不仅提供了实时的反应进程监控，还简化了样品浓度的测定过程，提高了实验的效率和准确性。
总的来说，实时荧光定量PCR仪通过Ct值和标准曲线的结合，实现了对样品中目标基因浓度的快速、准确测量，对于基因表达研究、疾病诊断以及药物筛选等领域具有显著的优势。
实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。