由于“无抗奶”尚未有明确的国家认证检测标准，各乳品企业在操作上通常依据自身的检测规范。通常，企业会采用两种方式来确保原料奶的达标：一是利用从美国安普公司引进的抗生素快速检测仪进行指标检验；二是基于发酵原理，即通过观察牛奶中乳酸菌的生长情况来判断。如果牛奶加入乳酸菌后能成功发酵，说明其中没有抗生素，反之则可能含有抗生素。
消费者从乳制品的外观和口感很难直接判断是否为无抗奶，但若愿意花费时间，可以尝试自行进行简单检测。首先，准备消毒工具，如小茶匙、筷子、不锈钢杯等，放入沸水中杀菌冷却备用。其次，取20茶匙鲜牛奶加热至沸腾，保温3分钟并搅拌防止结块。然后，将牛奶倒入玻璃瓶，加入一茶匙酸奶（建议使用大企业近期生产的酸奶以确保质量），搅匀后冷却至38℃（温度接近人体温度即可）。将混合物密封，置于20～38℃的温室中培养，约6～12小时后观察结果。如果发酵后形成凝固状并带有乳酪香味，说明牛奶无抗生素，否则可能存在抗奶成分（也可能因温度控制问题）。这种方法在家庭自制酸奶时也很适用，只需在热奶中加入适量白糖即可。
“无抗奶”，顾名思义，即不含抗生素的牛奶。早在2002年，这一概念便被光明乳业率先提出，号称“与国际标准接轨”，“无抗生素”的字样也登上了其产品包装。北京三元等不少乳品企业也纷纷跟进。