楼上提出的设计引物PCR不科学,冈崎片段只存在于复制叉,大小随机,没有可供设计引物的序列信息,而且即使能够PCR也不能说明问题
有冈崎本人的实验方案可供参考:
1968年冈崎(Reiji Okazaki)设计了两组实验,其一是脉冲标记实验(pilse-labeling
experiment)。冈崎利用T4噬菌体侵染E.coli(t-)菌株,并分别用dTTP(3H-T)进行2’’,7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记,分离提取T4噬菌体DNA,变性后,进行Cscl密度梯度离心,以检测具放射性的沉降片断,判断片断大小。结果表明经不同标记时间的,被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎都为10-20s, 即均为1000-2000核苷酸大小。第二组实验是脉冲追踪实验(pulse-chase
experiment),为了研究在脉冲标记实验中所发现的10-20s的小片段在复制全过程中的发展结局,冈崎将实验菌株先进行同位素标记培养30秒,然后转入正常培养基继续培养数分钟,分离DNA进行密度梯度离心,发现小片段已被连接成为70-120S的大片段。为此将DNA的这种复制方式称为不连续复制模式,将最初合成的10-20s片段称为冈崎片段。
可能你会觉得他的试验太麻烦,确实,不过那时是1968年,呵呵。现在做的话只要将提取的T4DNA变性后上电泳,然后放射自显影就可以取代昂贵的氯化铯梯度离心了。其他方案我认为可以完全依照前人的做法,只限答题哦~~自己设计试验的话就不用T4了,缺点太多。
参考资料:(Okazaki)冈崎1968年发表的论文:Mechanisms of DNA chain growth.