线性DNA的电泳迁移速率比开环质粒DNA快。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适。
常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。
凝胶浓度
对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在0.5~2%之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨,造成条带缺失现象。
缓冲液
常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
参考资料来源:百度百科-DNA分子
参考资料来源:百度百科-开环DNA
参考资料来源:百度百科-琼脂糖凝胶电泳
线性DNA的电泳迁移速率比开环质粒DNA快。
一、详细讲解如下:
1、琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大,摩擦阻力越大,第一条带是超螺旋带应该最亮,因为超螺旋结构完整紧密,跑得最快。
2、第二条带为线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA,不如超螺旋紧密,跑得相对慢 。第三条带为开环质粒,DNA双链的其中一根断开,导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构,结构臃肿,跑得最慢。
3、由于摩擦阻力的问题,琼脂就像有孔海绵分子筛,细菌质粒提取中电泳会出现三条带,最快的是超螺旋带,它是完整的,因为它的构型紧密,跑得快。
4、 第二条带在中间,是线性带,即环状双链DNA 两条链均断开,其分子构象变为线性,不如超螺旋紧密,跑得就慢一点。最慢的是开环带,即环状双链DNA 有一条链断开,拖着一条尾巴,显得很臃肿,所以跑得最慢。
二、参数理解:
1、蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适。
2、常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低。
3、但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。
扩展资料:
一、开环质粒DNA之间线性DNA的理解
1、取决于分子量大小和体积分子量小体积小的物质电泳迁移速度快 这个是学生化的常识啊共价闭合环状DNA结构紧凑 体积小 所以最快同理 其次为线装 开环线状你应该可以理解。
2、主要说说开环 开环就是双链DNA中的其中一条链短裂 然后此时的DNA分子就会变成环状分子 变成一大团东西 此时的体积就比线状大很多了 所以开环速度最慢,开环质粒DNA比线性DNA慢的原理解释。
二、开环质粒DNA比线性DNA移动慢的原理解释
1、对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在0.5~2%之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。
2、低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨,造成条带缺失现象。
3、缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
4、注意电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
参考资料来源:百度百科-DNA分子
参考资料来源:百度百科-开环DNA
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琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大,摩擦阻力越大,第一条带是超螺旋带应该最亮,因为超螺旋结构完整紧密,跑得最快。第二条带为线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA,不如超螺旋紧密,跑得相对慢 。第三条带为开环质粒,DNA双链的其中一根断开,导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构,结构臃肿,跑得最慢。
扩展资料:
由于摩擦阻力的问题,琼脂就像有孔海绵分子筛,细菌质粒提取中电泳会出现三条带,最快的是超螺旋带,它是完整的,因为它的构型紧密,跑得快。 第二条带在中间,是线性带,即环状双链DNA 两条链均断开,其分子构象变为线性,不如超螺旋紧密,跑得就慢一点。最慢的是开环带,即环状双链DNA 有一条链断开,拖着一条尾巴,显得很臃肿,所以跑得最慢。
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