rna保护液可以提蛋白吗

Question

如题所述

Answer 1

rna保护液可以提蛋白，RNA长效保存液是一种能高效抑制RNase活性的新型小分子混合物,用于防止RNase对RNA的降解作用。组织RNA长效保护液从新鲜组织细胞中提取RNA时，由于各种原因若不能马上处理样品，即使－70℃保存样品中的RNA也不稳定容易降解，而液氮保存既昂贵又不方便。RNA保护液是一种无毒的样品储存液，能迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆迅速而强烈灭活生物样品中的RNA酶，抑制RNA降解。

标本在4℃或室温长时间保存，其中的RNA不会降解，免去使用液氮或超低温冰箱的不便，从而有效地解决了样品保存及运输的问题。随后可采用当今世界上各种常见的RNA抽提试剂如RNAtrip、TRIzol或用户自备试剂提取样品RNA。

Answer 2

如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染
提取RNA时如何去除DNA的污染的方法：
注意实验室的标准化问题，注意污染的存在，同时严格按照说明书上的操作应该没有
问题。发现DNA污染，用DNAse I 消化1小时，37度
离心取上清的时候，一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。</ol>
RNA提取步骤：1. 匀浆处理：① 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。② 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。③ 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106 动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60%。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75%乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可。不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5%SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：
从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。
预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为：
肝和脾6-10μg，肾3-4μg，骨骼肌和脑组织1-1.5μg，胎盘1-4μg，上皮细胞8-15μg，成纤维细胞5-7μg 。</ol>
回答于 2017-11-08
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rnalater处理过的组织标本能反复冻融吗
液中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的含量一般很低。本文通过对HCV阳性标本进行冻融检测,冻融2次后有20份(62。冻融对丙型肝炎病毒核糖核酸检测结果的影响。结果32份标本冻融1次后有28份(87,然后再检测HCV RNA,而且冻融次数越多。2讨论标本反复冻融后可降低阳性检出率。1临床资料取32份经聚合酶链反应(PCR)检测HCV为阳性的标本.5%)为阳性,标本处理或保存不当易使HCV RNA的含量进一步降低而导致假阴性结果.8%)为阳性,-20℃冻融1~3次,建议HCV RNA检测以新鲜血清为宜。因此,冻融3次后有12份(42,间隔2 h,阳性检出率降低越明显.5%)为阳性,观察冻融对HCV阳性标本的影响
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rnalater处理过的样本，可以用来提取总蛋白吗
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提RNA组织保存
组织块可以直接保存不用分开，-80度冰箱存RNA提取组织材料是没有关系的，我最多存过半年没有问题。你用PBS洗也没关系，但不要反复长时间洗涤。最后给你个建议，对于提取RNA的样品，你可以在取样后立刻研磨后放到trizol试剂里，这样可以常温存放几个月没问题。之后直接就拿着这个存放液按照trizol法直接操作下去。
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关于免疫球蛋白e高会引起肺结节这件事一定，千万，万万不能做!
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Answer 3

小鼠淋巴结只有一点点，又要提RNA跑PCR又要做WB又要做病理切片，我怎么办？挺急的在线等….

原代细胞量特别少，又要提RNA跑PCR，测DNA我怎么办？挺急的在线等….
在线等不来….

于是我找了官网的Trizol说明书，说明书告诉我可以用Trizol把RNA\DNA\蛋白都提取出来

我信了它的邪。

Trizol中有酚和异硫氰酸胍，和β-巯基乙醇。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。氯仿：虽然有变性蛋白的作用，但主要用来分相。所以理论上来说Trizol是可以用于提取蛋白质的。

Answer 4

rna保护液可以提蛋白。

Answer 5

直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。