用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)
脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，
细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；
如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)
，该菌属于革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，
是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，
当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，
所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，
它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，
从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，
两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、
类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、
使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-
碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，
经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，
由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，
类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-
碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，
细胞被染上复染剂的红色。
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