植物组织培养中细菌的去除方法?

如题所述

组培的灭菌是有很严格的要求的,这里我大致说下

实验用具;培养皿、镊子、玻璃棒等能经受高温高压的物件用高压蒸汽灭菌,120度灭菌半小时。实验台酒精擦拭,紫外光等照射至少15 min
外植体:首先取材上就要注意避免含病毒和微生物多的部位,一般选择正的萌动的茎段,芽,幼叶等,顶端分生组织培养也是植物脱毒的重要手段。采集的外植体首先要取出杂质,用洗衣粉或者稀释的84消毒液进行初步的洗脱尘土等附着物,之后放在清水中冲洗15 min,然后把植物体分段,剪成小段放入灭菌好的洗涤瓶,加入酒精,摇晃冲洗2遍,再加入升汞洗涤,最后用水清洗干净。放入培养基。
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第1个回答  2010-07-29
实验用具;培养皿、镊子、玻璃棒等能经受高温高压的物件用高压灭菌,121度灭菌40min。实验台酒精擦拭,紫外光等照射20~30 min
外植体:天气连续晴2天以上,首先取材上就要注意避免含病毒和微生物多的部位,还要无病菌,一般选择正的萌动的茎段,芽,幼叶等,顶端分生组织培养也是植物脱毒的重要手段。采集的外植体首先要取出杂质,用洗衣粉进行初步的洗脱尘土等附着物,之后放在清水中冲洗1~2h,然后把植物体分段,剪成小段放入灭菌好的洗涤瓶,加入75%酒精,30s,无菌水冲洗,再加入0.1%升汞洗涤,一般4~8min,最后无菌水清洗干净。接入培养基。有内生菌的在酒精后可用青霉素或其他抗生素溶液,然后再用升汞消毒。植物体表面绒毛较多的,消毒时加吐温。
第2个回答  2010-07-20
首先是取材,取根尖分生区的细胞,这区域的细胞分裂速度快,基本不含任何细菌和病毒;至于之后的灭菌,可以使用紫外照射的方法
第3个回答  2010-07-20
对培养液进行高温杀菌处理。 还可以加个紫外线照射。
第4个回答  2010-08-03
你这个问题太大了,有没有具体的阶段?

对于用到的工具,如三角瓶、培养皿等当然是高压灭菌,而一般的解剖刀等直接酒精灯上烧就行。
对于一般的培养基也是需要高压灭菌后才能使用,另外,需要注意的是,有些植物激素不能直接高温,需要过滤灭菌。
至于材料,也就是外植体,也要看不同的材料,一般的用70%酒精泡1-2分钟,无菌水洗3次,再2%次氯酸钠10分钟左右就行了,当然,得在超净工作台中操作
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