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RNA文库构建为什么要逆转录
如题所述
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推荐答案 2022-07-29
因为
真核生物
的DNA有一部分是不表达为蛋白质的,只有RNA才会表达为蛋白质,所以研究蛋白质需要用RNA反转录为CDNA,再扩增为DNA后研究。
RNA一来没有DNA稳定性强(单链)二来容易变异,所以先
逆转录
成稳定且不宜变异的dna较为合理。
因为没有有效的方法将RNA全部分类并分别提取出来。所以都是先提取总RNA然后根据mRNA具有polyA尾的特点反转录成cDNA。
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相似回答
何谓
逆转录
?它具有
什么
生物学意义
答:
逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充
。人们通过体外模拟该过程,以样本中提取的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成出互补的cDNA,构建cDNA文库,并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。
逆转录
简介
答:
逆转录,
即RNA作为模板合成DNA的过程,这一生物学现象在RNA病毒如艾滋病病毒(HIV)的复制中起关键作用
。这种特殊复制方式需要逆转录酶的催化作用,使病毒能够利用自身的RNA序列生成DNA拷贝。虽然逆转录与反转录在概念上可能被混淆,但两者本质上有所区别。逆转录是RNA病毒的自然行为,它在宿主细胞内部发生,...
什么
是
逆转录
答:
逆转录过程是病毒的复制形式之一
,如RNA病毒中的逆转录病毒,DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要经过逆转录。逆转录过程在真核细胞中也同样存在,例如逆转座子和端粒DNA的延长均存在逆转录过程,需逆转录酶的催化。
逆转录
和反转录有区别吗?
答:
本质是一样的。有一点细微区别,后者是生物的自然发生的过程,前者是人工进行的过程。
逆转录是RNA类病毒形成自己的DNA并整合到宿主细胞的DNA上
,以RNA为模板形成DNA的过程。反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程。
反转录与
逆转录
的区别
答:
逆转录
过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充。转录能被一些特异性的抑制剂抑制,有些抑制剂是治疗某些疾病的药物,有的则是研究转录机理的重要试剂。一类抑制剂同时抑制DNA复制,例如:放线菌素D、纺锤菌素、远霉素、溴乙锭和黄曲霉素等。第二类抑制剂作用于
RNA
聚合酶...
构建
全长cDNA
文库
时如何保证反
转录
效率和连接成功率?
答:
反
转录
过程: 反转录是关键步骤,它将易降解的
RNA
转化为不易降解的cDNA。如果反转录不成功,
文库构建
方案可能失败。反转录效率低可能源于mRNA未完全反转录或部分降解,这将影响文库的全长性。分子量检测: 建成的cDNA
需要
通过层析柱分级,注意操作细节,避免影响文库质量和片段分布。检测cDNA浓度和分子量分布...
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