操作步骤
(1) 准备细胞
取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细
胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层大约60％
丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法
B法参照书将液体量减少后的结果
病毒稀释液根据是否需要
胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的
滴度确定稀释的倍数。首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。若接种8个孔，则相应增加液体量。上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：
1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。】
(3) 接种
取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。【切记：设置正常的细胞对照。每次实验要重复4次，计算
标准差。】
37℃CO2培养箱中孵育1h，取出培养板吸去病毒液（从低浓度向高浓度吸取可避免窜孔），加入维持液200µl继续在 CO2培养箱中培养。
(4) 培养
将培养板放置于CO2培养箱。培养温度37℃，培养5-7天。
(5) 测定结果
取出培养板，显微镜下观察细胞病变。
兽药典2005版
举例：
将病毒等悬液作10倍系列稀释，取适宜稀释度，定量接种实验动物、胚或细胞。由高稀释度开始接种，每个稀释度接种4～6只（枚、管、瓶、孔），观察记录实验、胚或细胞的死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验动物（胚、细胞）的
百分率。按Reed-Muench法计算半数致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50、PD50）。
计算公式为：
logTCID50=高于50%的病毒稀释度的
对数＋距离比例×稀释系数的对数
试验示例（以TCID50为例，接种量为0.1ml）
病毒稀释度 观察结果 累计结果
CPE数 无CPE数 CPE（%） CPE数 无CPE数 CPE（%）
10-4 6 0 100 13 0 100
10-5 5 1 83 7 1 88
10-6 2 4 33 2 5 29
10-7 0 6 0 0 11 0
距离比例=
logTCID50=-5＋0.64×(-1)=-5.64
则：TCID50=10-5.64/0.1ml。
即：将病毒悬液作10-5.64稀释后，接种细胞0.1ml，可以使50%的细胞产生CPE。