用试剂盒提细胞RNA时需做什么准备

Question

如题所述

Answer 1

准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，
容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。
如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。
还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着样品吹气。

Answer 2

1.需要把所有提RNA中需要用的枪头，枪头盒，EP管用DEPC处理12h，按比例配置好DEPC水，然后高压灭菌使DEPC挥发。（DEPC有毒，操作时一定保护好自己昂）
2.70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），-20℃预冷，新开封的三氯甲烷，异丙醇。
3，如果是提组织的RNA，研钵、研杵、钥匙均用酒精烧，趁热用锡箔纸包好，等冷却后放入-20℃预冷。要是提细胞的，则把细胞提前-80冻起来，记得提前要把培养液弃掉，要不后面浓度太低（培养液相当于稀释了TRIZOL）
3.提取前放一包PE手套在里面，就不要拿出来了，过程中一定要勤换手套，尤其是加了氯仿离心完取上清的那步。一定佩戴口罩，尽量不说话，绝对不能对样品或者EP管吹起，唾液中有大量的酶。