tris-hcl缓冲液的配置方法为:若要配制1LpH为8.0的1mol/LTris-HCl母液(M=121g/mol),首先加入121gTris到1L烧杯中,加入600mL超纯水溶解后,用浓盐酸调节pH至8.0左右,然后加水定容至1L。
一、tris-hcl缓冲液优点:
1、碱性强,只需要这一种缓冲体系就可以配制从酸性到碱性的大pH范围缓冲液。
2、对生物化学过程干扰很小,不与钙镁离子及重金属离子反应。
二、tris-hcl缓冲液缺点:
1、缓冲液的pH受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释10倍,pH变化大于0.1。
2、温度变化对缓冲液影响很大,例如4℃时配制的pH8、4缓冲液,在37℃时pH变为7.4,所以一定要在使用温度下配制。
3、易吸收空气中的二氧化碳,因此配好的缓冲液要盖严、密封。
4、对某些pH电极有一定的干扰作用,因此应使用Tris溶液兼容的电极进行检测。
5、Tris在一定程度上与各种分子发生反应,包括RNA酶抑制剂、醛、酶及常见的金属离子包括Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,配制过程中应考虑与其他组分的相互作用。
6、吸入,摄入,皮肤吸收Tris可造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜。
7、作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用Tris,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。
Tris缓冲液的应用领域和用途
一、应用领域
分子生物学核酸及蛋白研究。
二、用途
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C. elegans)核纤层蛋白(lamin)的中间纤维的形成。
Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的pH。此外,Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。
Tris也被用作滴定标准物。作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用Tris,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。