1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。
2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液，3个
阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18～24小时。
3．甩去培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10％
甲醇溶液固定细胞30秒钟。
4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml
结晶紫染液，室温中放置20分钟。
5．轻轻甩去染色液，用
蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。
6．测定前，每孔加0.1ml 33％
醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的
细胞因子活性
追问我想测的是细菌生物膜，不是磷脂双分子层的那种生物膜，大致步骤也跟你的差不多，但是我在染色的时候在壁上会有一圈被染的颜色很深，但是我觉得那不是生物膜，那也许是造成误差所在，我想怎么去解决这个问题？
追答测生物膜？？结晶紫染液貌似只能跟DNA结合吧
追问革兰氏染色法的初染就是结晶紫，染的是细胞壁，不过还是得谢谢你，金币给你吧，呵呵。
追答其实我也没帮什么忙。。呵呵。。谢啦