66问答网
所有问题
当前搜索:
镍柱亲和层析蛋白纯化
蛋白质纯化
中的
镍柱纯化
步骤是什么
答:
镍柱纯化
的基本步骤包括样品准备、柱
层析
、洗脱、再生等环节。下面将详细介绍镍柱纯化的具体步骤:样品准备 样品制备是成功进行镍柱纯化的关键之一。首先,需要准确测量目标
蛋白质
的含量,确定合适的溶液浓度。然后选择适当的缓冲液(如TBS、PBS等)保证蛋白质的稳定性。此外,将样品过筛或使用超声波破碎器打破...
镍离子
亲和
柱
纯化蛋白
的洗脱液和平衡液怎么配?
答:
1. 平衡液是缓冲液,应该是PB或PBS,这个配方很多手册可以查,注意
亲和层析
的pH是一个比较重要的参数,会影响洗脱过程的,有一种
镍柱
洗脱方法就是高pH上样,低pH洗脱。2. 洗脱液一般是平衡Buffer中加入咪唑,没有缓冲的体系有可能造成蛋白的变性。
NI-NTA
蛋白
提纯的原理是什么?
答:
Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性
蛋白蛋白
结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后,带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里,其他的杂蛋白流出。Ni-NTA
纯化
介质是Ni离子金属螯合介质。高
亲和
Ni-NTA纯化介质(L00250)是把螯合剂(氮川三乙酸或NTA)共价偶联到琼...
在
纯化蛋白
时,镍离子有什么作用?
答:
镍柱
纯化his-tag protein是常用的方法。原理大概就是his上有咪唑杂环,这个环可以带有很多电子,可以与含正电的金属离子发生亲和反应。由于
蛋白
质是两性的,所以当pH变化时,带电也会发生变化,所以可以控制pH进行亲和/洗脱,从而纯化目的蛋白。
蛋白
过
镍柱纯化
的原理和步骤是什么
答:
步骤是:过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给
蛋白
提供最适的环境,我一般平衡4个柱长,然后蛋白上样,你可以让他自己挂,这样挂柱子的效果好一些,如果流速太慢,可以加个恒流泵,但是一定不能太快,太快挂柱效果差,当然你也可以选择循环挂柱,就...
Ni
柱亲和层析
的具体操作?
答:
Ni柱填料一般有两种,NTA和IDA
亲和
柱,你这个大小的
蛋白
1ml填料理想状况可以吸附20mg以上,最多2ml填料不就够了 。这种柱子一般不用大体积,一般装柱都是1-2ml填料,我也用过5-10ml填料的,按比例使用同等条件洗脱效果比小体积的柱子要差很多。
纯化
是纯度和效率的矛盾,你需要什么样的纯度,需要多大量...
可溶性
蛋白
的
纯化
方法...详细的,我的用的无血清培养基,带His标签,问...
答:
用
镍柱镍柱
分离
纯化
固定金属离子
亲和
柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子,例如锌。铜,镍,铁等形成复合物。因此,该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的
蛋白质
。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以,结合的强度是和缓冲液...
Abbkine的
镍柱纯化蛋白
买哪种
亲和层析
填料好?
答:
亲和层析
填料有多种,针对Abbkine有如下:PurKine His-Tag IMAC-NTA Resin 6FF PurKine 组氨酸标签 固定化金属亲和层析-NTA树脂(6%交联)PurKine His-Tag Cu-IDA Resin PurKine 组氨酸标签 Cu(铜)-IDA树脂 PurKine His-Tag Co-NTA Resin PurKine 组氨酸标签 Co(钴)-NTA树脂 PurKine His...
His
镍柱
标签
蛋白纯化
用什么填料比较好???
答:
当然是用PALL的IMAC HyperCel金属
亲和层析
填料了。动态载量高,而且是一次离子螯合操作,多次稳定的
纯化
。价格也便宜,目前还在搞买一送一的活动。
镍柱纯化蛋白
过程中流速过快或过慢有什么影响?为什么
答:
这种结合里相对较弱,一般来讲,在过柱子的过程中有很多NI只与组氨酸标签中的一部分咪唑环结合,所以在这种情况下如果流速过快会阻碍他们进一步的结合,另外,流速过快大大缩短了NI与咪唑环结合的时间,减低了结合几率,所以用
镍柱纯化蛋白
时流速不要太快 ...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
镍柱亲和层析蛋白纯化优点
镍柱亲和层析蛋白纯化步骤
镍柱亲和层析蛋白纯化的PB
镍柱再生
蛋白浓缩超滤管使用方法
镍柱纯化蛋白说明书
镍柱亲和层析蛋白纯化原理
浓缩柱蛋白浓缩步骤图解
镍柱纯化原理及方法