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转膜marker不见了
...电泳时预染
Marker
很值条带也很清晰,但是
转膜
后膜上条带都
没有了
...
答:
可能是转反了,或者是转过了
。而且转膜不是恒流么,你怎么是恒压转。我一般是300mA,90分钟。
做western blot时为什么
转膜
后膜上
没有
蛋白?
答:
另外膜上
没有marker
的话,胶上还看得到marker吗?如果还在胶上,那么蛋白质可能也还在胶上,可以改变电流和时间重做一遍。如果胶上膜上都没有,那搞不好就跟二楼说的一样,正负极接反,样品全跑到缓冲液里去了。。。
转膜
转不上fermentas的
marker
妥妥在胶上是什么原因?
答:
Biorad的机器,黑上有胶,白下有膜,膜是0.45um的,
marker
是fermentas非小分子的marker,黑红塞格子的时候没塞反,格子和电极黑红也是一致的,盖子的黑红也是一致的,内置冰袋,外有冰浴,250ma恒流,摁了run键,
转膜
两小时,机器无报错,转膜液不是第一次用,就这次奇葩了,膜有用甲醇激活,闻了下是甲醇的味道,究竟是何缘...
12%预制胶用多大电流
答:
如果出现预制胶和膜上的预染
marker
都很少,说明蛋白有可能是转到膜外了。
转完膜以后
marker
很弱
答:
转完膜以后marker很弱是因为转膜液SDS过高
。Marker是表面覆盖有特殊反光材料的标记物,常见形状有球形、半球形。但是变淡原因并不唯一,可以具体观察一下再做判定。SDS(SafetyDataSheet,安全数据表)是危险化学品生产或销售企业按法规要求向客户提供的一份关于化学品组分信息、理化参数、燃爆性能,毒性、环境...
为什么
转膜
后正面的maker比背面淡
答:
1、
转膜
时间不够会导致胶上的蛋白包括mark
没有
完全转到膜上。2、转膜时间长了会导致胶上的蛋白包括mark已经穿过膜到滤纸上,这两种原因都有可能导致转膜后正面的maker比背面淡。建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题。
Western Blot
转膜
时胶和膜放反了有影响吗
答:
那蛋白就都转到滤纸上去了,
没有
到膜上。你找点丽春红染染膜看看,估计膜上什么也没有哇。不用往下做了。当然,如果你在膜上看到预染
Marker了
,还是值得再去尝试一下的。
western blot 为什么
marker不
清晰
答:
可能的原因有, maker加的量少,半干法
转膜
的时候转缓液加多了,maker
没有
保存好,如长期放在室温分解了,也可能是跑电泳的胶的问题。跑胶的时候电压越小条带相对弥散些,不过还不至于maker不清楚。
WB
转膜
多次失败,求助
答:
基本就转1.5-2h。一般没问题的呀。我觉得你检查一下你的
转膜
缓冲液(我一般不重复用),还有就是铺膜有
没有
气泡。另外实在
找不到
原因可以适当延长转膜时间,但也不可以太长。其实120KD转两小时足够了。另外,我有时封闭后也会
marker
看不清楚,影响不大,只要还能辨别marker的条带就ok了。
转膜
转过显影会显出来吗
答:
显影-
转膜
后看和你的蛋白分子量近似的预染Marker有
没有
转过去,如果
marker没
问题,那基本可以认为你的蛋白转过去了。显色的话应该ECL好些吧,灵敏度更高呢,HRP标记的二抗孵育完后用TBST充分清洗,然后加ECL试剂,包好后压片,一般如果你能够看到荧光的话,压片5min以内就可以看一下,如果看
不见
的话,...
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