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细菌dna提取注意事项
请教:
细菌DNA的提取
答:
注意:长时间保存DNA可放于-20℃,但要尽量减少反复冻融,否则影响DNA质量
。三、盐析法 介于方法一和方法二之间,CTAB虽然取出糖分效果较好,但CTAB本身也是有毒的,所以此方法放弃了CTAB。实验注意:
提基因组最好要将枪头尖剪掉
(剪掉以后在酒精灯上迅速过一下,使其断口圆滑)。以免枪头损伤基因组,...
DNA提取
过程中的关键步骤及
注意事项
有哪些?
答:
第一,
时间不能过长,千万不要这时候去接电话
,因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂;第二,必须温柔混合,不然基因组DNA也会断裂。质粒抽提流程详解——中和 加入400ul Buffer S3,剧烈颠倒5~10次,使之充分中和,同时将大块白色沉淀振成小块,便于离心。在约13600转/min的速度下离心沉淀1...
如何从细胞中
提取dna
答:
制备过程中,细胞破碎的同时就有Dnase释放到
提取
液中,使
DNA
因被降解而影响得率,在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA,既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离,再加入阴离子去垢剂0.15%的SDS,经过2h搅拌,或用氯仿-异醇除去蛋白,通过离心使蛋白质沉淀而除去,得到的是含有核酸的上清液。然后用95%的预冷乙...
提取DNA的
试剂为什么要先进行高温灭菌
答:
回答:如果试剂不除菌,那么
细菌
中含有
的DNA
酶会导致DNA降解。此外,日常实验室环境中也含有DNA酶,而灭菌可以灭活DNA酶。
基因工程实验Ⅱ大肠杆菌质粒
DNA的
抽提及检测『Protocol』
答:
①染色体
DNA的
去除 :在富集培养目标菌种后,首先应裂解
细菌
细胞,采用含有SDS的NaOH溶液裂解菌体释放质粒,同时氢氧化钠的强碱性,可使DNA氢键断裂,双螺旋结构破坏而变性,再加入中和缓冲液,可使部分变性的质粒DNA复性,而染色体DNA不复性,因此使质粒DNA与染色体 DNA分离开。②细菌中的RNA可以通过RNaseA...
细菌基因组dna提取
时常遇到哪些问题怎样解决
答:
7. 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟,沉淀
DNA
。8. 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。佳学基因解码,专注于基因信息的解读和应用。通过提供符合不同年龄段的基因信息产品,将基因信息、基因工程、...
微生物
DNA提取
的原理和方法是什么?
答:
分子热运动也会减少所抽提到
的DNA
分子量,所以
提取
过程也要尽可能在低温下进行。另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA,所以制备过程要抑制其核酸酶的活性。另外制备的
细菌
染色体DNA 必须是高纯度的,以满足基因工程中各种酶反应的需要,制备的样品必须没有蛋白污染,没有RNA,各种...
请教:
细菌基因组DNA提取
答:
细菌基因组DNA的提取
方法综述,提供了五种方法。一、快速微量提取法 A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min, 丢去上清夜,收集菌体。B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混匀,置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液,混匀后...
细菌DNA提取
各步骤和目的,能详细的教一下吗
答:
TE是用来浮起
细菌
的。如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下。SDS可以让细胞裂解,并与核蛋白结合(当然也包括
DNA
)。蛋白酶K自然是降解蛋白的。到这一步可以直接用异丙醇沉淀,70%乙醇洗一次(洗去少量的盐分)。凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了。当然,在蛋白酶K处理过后,也可以用1.4M ...
细菌
总
DNA
怎样
提取
和鉴定
答:
细菌
总
DNA的提取
将菌株接种于液体LB培养基,37℃震荡培养过夜.取1.5ml培养物12000rpm离心2min.沉淀物加入567 ul的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h.加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混匀,再加入80ul CTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min.加入...
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