亚硫酸氢钠联合限制性内切酶分析法（COBRA)

Question

急 请问哪里能找到 亚硫酸氢钠联合限制性内切酶分析法(combined bisulfite restrictionanalysis，COBRA) 的具体操作方法？主要是用亚硫酸氢钠处理DNA这部分的~~请大家指点一下~~

Answer 1

联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法。联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法(combined bisulfite restriction analysis, COBRA)原理：先对样本DNA行亚硫酸氢钠处理后，PCR 扩增目的片段，随后用限制性内切酶消化，此酶识别序列中需包含CG 序列，如BstUI(CGCG)。若其识别序列中的C 发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则PCR 扩增后保留为CGCG，BstU I 能够识别并进行切割；若待测序列中，C 未发生甲基化，则PCR 后转变为TGTG，BstUI 识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可得出原样本中甲基化的比例。Brena等联用COBRA和Agilent 2100 Bioanalyzer对酶切产物进行直接分析，使C O B R A 的定量更快速、准确且无放射性污染。该法的优点是：方法相对简单，不需预先知道CpG 位点及样本序列；可进行甲基化水平的定量研究；需要样本量少，可用于石蜡包埋样本的分析。缺点是：只能获得特殊酶切位点甲基化情况，因此检测阴性不能排除样品DNA中甲基化存在的可能；由于酶和PCR 的使用，序列分析受到限制。本回答被提问者采纳