秦皮 秦皮为常用中药，具有清热燥湿、清肝明目、止痢等功效，用于痢疾、泄泻、赤白带下、目赤肿痛等症。其有效成分为香豆素类，其中七叶内酯和七叶苷是抗痢疾杆菌的有效成分。由于主含香豆素，对药用秦皮的鉴别，除形态鉴别外，其水浸出液在紫外灯下特有的蓝色荧光也是重要的鉴别依据。[七叶内酯和七叶苷的提取分离方法]
白芷 白芷具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓之功效，用于感冒头痛、鼻塞、疮疡肿痛等症。主要含有香豆素和挥发油，多为呋喃香豆素，能代表疗效的主要有氧化前胡内酯、川白芷内酯、当归白芷内酯等。
前胡 前胡具有散风、清热、降气化痰功效，用于风热咳嗽痰多等症，主要含有香豆素类成分，还含有少量皂苷、四环三萜及挥发油等。已从白花前胡中分离的香豆素有20多种，大多为7，8-二氢吡喃香豆素，少数为呋喃香豆素及简单香豆素。从紫花前胡中已分离到10多种香豆素，多为直型二氢吡喃或呋喃香豆素，还有其葡萄糖双糖苷类。
独活 独活具有祛风除湿、通痹止痛之功效，用于风寒湿痹、腰膝疼痛等症。其主要成分为香豆素类，其中蛇床子内酯为主要成分，此外还有多种呋喃香豆素化合物。
黄芩
黄芩中含多种黄酮类成分，含量最高的为黄芩苷，苷元为黄芩素（5，6，7-三OH黄酮），黄芩苷是5，6二OH，7-O-葡萄糖醛酸黄酮苷，除有遇FeCl3显色等反应外，较特殊的有几乎不溶水、酸水，难溶于MeOH等，因为是葡萄糖醛酸的苷，所以很难被酸水解。可被黄芩酶催化水解，生成的苷元黄芩素分子中具有邻三酚羟基，易被氧化转为醌类衍生物而显绿色，这是保存或炮制不当的黄芩能够变绿色的原因，黄芩变绿后，有效成分受到破坏，质量随之降低。黄芩苷的钠盐、钾盐易溶水。
[黄芩中的某些黄酮类化合物][黄芩苷的提取流程]
黄芩苷虽然几乎不溶水，但在植物体内是以盐的形式存在，可溶水，所以黄芩药材粗粉加水煮可把黄芩苷（以黄芩苷盐的形式）提取出来，当向溶液中加HCL调pH1～2时，黄芩苷盐解离，生成的黄芩苷几乎不溶于酸水，而析出沉淀。再将此沉淀悬浮于水中，滴加40%NaOH，黄芩苷又成钠盐，而溶解。此时应注意NaOH不可过量，否则，再加入等量乙醇时会呈现胶冻状，不易过滤。继续往稀醇溶液中加HCl调pH1-2，黄芩苷纳盐又被解离，难溶于稀醇而析出沉淀，此沉淀经水、50%乙醇、95%乙醇洗涤可得较纯的黄芩苷，再经甲醇多次结晶，可得纯度更高的黄芩苷。
黄酮含义及存在形式
经典的含义：基本母核为2－苯基色原酮的一类化合物，称为黄酮类化合物。当时，由于此类化合物为黄色，4位具有酮式羰基，故称黄酮类化合物。
现代的含义：凡两个苯环（A环、B环）通过三碳链相互联结而成的一类成分称为黄酮类化合物。此含义中包含的化合物有黄色的，也有淡黄色的、白色的。化学结构中有酮式羰基，也有无羰基的，苯环在2位的及苯环在3位的等等。从下面的分类中可看出。当然黄色的黄酮类化合物占绝大多数。
黄酮类化合物广泛存在于植物中，不少的常用中药中主要含有此类成分。大多与糖结合成苷（称为黄酮苷类），有的与葡萄糖醛酸结合成苷，如中药黄芩中的黄芩苷；有的以游离形式存在，即未与糖结合，称为游离黄酮或黄酮苷元，同一中药中可能同时存在游离黄酮及其苷，如中药黄芩中含有黄芩苷元（黄芩黄素5、6、7－三OH黄酮）也含有黄芩苷（5、6－二OH，7－O葡萄糖醛酸黄酮苷）。
黄酮类化合物的取代基有羟基、甲氧基、甲基、亚甲二氧基（－O－CH2－O－）异戊烯基等。
黄酮苷类可有单糖苷、双糖苷和叁糖苷。有的结构更为复杂，也有以碳苷形式存在，如中药葛根中的葛根素、从银杏叶中得到的桂皮酰衍生物，如山柰素－3－鼠李糖－2－（6－对羟基－反式－桂皮酰）－葡萄糖苷。（山柰素为3、5、7、4’－四OH黄酮）等。
分类
根据A环与B环中间三碳链的氧化程度（C3位是否有OH，C4位是否有C=O，C2与C3是否为双键等），B环联接位置（2或3位）以及C环是否构成环状结构等特点，可将黄酮类化合物分很多小类。
黄酮类化合物苷元的主要结构类型
黄酮二氢查耳酮
黄酮醇花色素
二氢黄酮黄烷-3-醇
二氢黄酮醇黄烷-3，4-二醇
异黄酮双苯吡酮(酮)
二氢异黄酮
噢(橙酮)
查耳酮
黄酮类化合物的性状
形态
黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末。
颜色
一般说来，黄酮、黄酮醇及其苷类多呈灰黄色至黄色，查耳酮为黄至橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类，因在分子结构中不存在交叉共轭体系，故不呈黄色，几乎为无色。如在黄酮、黄酮醇分子中，尤其在7-位或4′-位引入—OH及—OCH3等供电子基后，产生ρ-π共轭，促进电子重排，使共轭系统延长，化合物颜色加深。但—OH、—OCH3引入分子结构中其他位置，则对颜色影响较小。
[黄酮、黄酮醇分子的结构互变]
如果C2、C3间的双键被氢化，则交叉共轭体系和加合关系中断，故二氢黄酮和二氢黄酮醇几乎无色。异黄酮共轭很少，仅显微黄色。
花色素所显的颜色，随pH不同而改变，一般pH8.5显蓝色，pH不同可能促进结构产生可逆变化。
旋光性
二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、二氢异黄酮及其衍生物、紫檀素、鱼藤酮由于分子内含有不对称碳原子，因此具有旋光性。其余黄酮苷元，无旋光性。黄酮苷类由于在结构中引入了糖的分子，故均有旋光性，且多为左旋。
酸碱性
黄酮类化合物因分子中具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶中。其酸性强弱与酚羟基数目的多少和位置有关。例如黄酮的酚羟基酸性由强到弱顺序是：
7，4′-=OH>7-或4′-OH>一般酚羟基>5-OH
7-和4′-位有酚羟基者，在ρ-π共轭效应的影响下，使酸性增强而溶于碳酸氢钠水溶液。7-或4′-位上有酚羟基者，只溶于碳酸钠水溶液，不溶于碳酸氢钠水溶液。具有一般酚羟基者只溶于氢氧化钠水溶液。仅有5-位酚羟基者，因可与C4=O形成分子内氢键，故酸性最弱，因此，可用pH梯度法来分离黄酮类化合物。
黄酮类化合物分子中γ-吡喃酮环上的1-位氧原子，因有未共用电子对，故表现出微弱的碱性（全甲基化的多羟基黄酮类化合物碱性较强），可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，该盐极不稳定，加水后即分解。
黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的盐，常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别被试成分所属的类型。
溶解性
黄酮类化合物的溶解度因结构不同而有很大差异。
1.一般黄酮苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等为平面型分子，因堆砌紧密，分子间引力较大，故难溶于水。而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面型分子[如图]，故排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，因而在水中溶解度稍大。
异黄酮类化合物亲水性比平面性分子增加。花色素类亲水性较强，虽然它们也属于平面型结构，但因以离子形式存在，具有盐的通性，故水溶性较大。
2.黄酮类化合物多是多羟基化合物，一般不溶于石油醚中，故可与亲脂性杂质分开。
3.黄酮类化合物的羟基被糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶及稀碱溶液中，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等有机溶剂中。
苷分子中糖基的数目多少和结合的位置，对溶解度亦有一定的影响。一般多糖苷比单糖苷水溶性大；3-羟基苷比相应的7-羟基苷水溶性大。
黄酮类成分的提取和分离
提取方法
黄酮类化合物的提取，主要是根据被提取物的性质及伴存的杂质来选择适合的提取溶剂，苷类和极性较大的苷元，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂[例如甲醇-水（1:1）]进行提取。大多的苷元宜用极性较小的溶剂，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取，多甲氧基黄酮类苷元，甚至可用苯来提取
乙醇或甲醇提取
乙醇或甲醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂，高浓度的醇（如90%～95%）适宜于提取苷元。60%左右浓度的醇适宜于提取苷类。提取的次数一般是2～4次，可用加热抽提法或冷浸法。如银杏黄酮苷可用65%乙醇回流提取
热水提取法
热水仅限于提取苷类，例如自槐花米中提取芦丁。由于热水提取出的杂质较多，故不常使用。
碱性水或碱性稀醇提取
由于黄酮类成分大多具有酚羟基，因此可用碱性水或碱性稀醇（如50%的乙醇）浸出，浸出液经酸化后可析出黄酮类化合物。稀氢氧化钠水溶液浸出能力较大，但浸出杂质较多，如将其浸出液酸化，迅速滤去（如在半小时内滤去）先析出沉淀物（多半是杂质），滤液中再析出的沉淀物可能是较纯的黄酮类化合物。[石灰水的优点][石灰水的缺点]5%氢氧化钠稀乙醇液浸出效果好，但浸出液酸化后，析出的黄酮类化合物在稀醇中有一定的溶解度，降低了产品收得率。用碱性溶剂提取时，所用的碱浓度不宜过高，以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物母核。当有邻二酚羟基时，可加硼酸保护。
系统溶剂提取法 用极性由小到大的溶剂依次提取。例如先用石油醚或己烷脱脂，然后用苯提取多甲氧基黄酮或含异戊烯基、甲基的黄酮。氯仿、乙醚、乙酸乙酯可以提取出大多数游离的黄酮类化合物。丙酮、乙醇、甲醇、甲醇－水（1：1）可以提取出多羟基黄酮、双黄酮、查耳酮、噢哢类化合物。稀醇、沸水可以提取出苷类，1%HCl可以提取出花色素类等
分离方法
溶剂萃取法
此法是初步分离方法，主要将苷元、苷进行分离。较常用的操作是乙醇提取物中加适量水后，依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，石油醚中可能无黄酮或仅有多甲氧基黄酮，乙醚中为部分游离黄酮，乙酸乙酯中可能有多羟基黄酮及黄酮单糖苷，正丁醇中有二个糖以上的黄酮苷。
聚酰胺吸附法
黄酮类化合物大多具有酚羟基，可被聚酰胺吸附，而与不含酚羟基的成分分离。
中药粗粉
│
↓70%～80%乙醇提取
乙醇提取液
│
│减压回收乙醇，放置
┌──────────┴──────────┐
↓ ↓
不溶物 溶液
（树脂等亲脂杂质。 │通过聚酰胺柱，依次用水、
可能有游离黄酮类化合物） │95%乙醇洗脱
┌──────┴──────┐
↓ ↓
95%乙醇洗脱液 水洗脱液
│ （糖类等亲水性杂质）
↓减压回收乙醇至干
总黄酮
不溶物中如含有游离黄酮类化合物，可用下述方法处理：①利用碱溶解酸沉淀法。②以石油醚冷洗，除去亲脂性杂质，再用苯等有机溶剂溶解，通过硅胶柱除去极性大的杂质，柱体用苯洗脱，所得苯液减压浓缩，即得游离的黄酮类化合物。
铅盐法
此法过去曾用于研究，目前已很少采用。一般是在乙醇或甲醇溶液中依次加入适量中性醋酸铅、碱式醋酸铅水液，分别使具有邻二酚羟基成分（包括黄酮）及含羟基成分，具有一般酚羟基的成分分离，再分别将铅盐沉淀悬浮于醇中，脱铅后得到成分。
硼酸铬合法
有邻二酚羟基的黄酮类化合物可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此可与无邻二酚羟基的黄酮类化合物相互分离。
pH梯度萃取法
pH梯度萃取法适合于酸性强弱不同的游离的黄酮类化合物的分离，将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）中，依次用5%NaHCO3（萃取出7，4′－二羟基黄酮）、5%Na2CO3（萃取出7－或4′－羟基黄酮）、0.2%NaOH（萃取出具一般酚羟基黄酮）、4%NaOH（萃取出5－羟基黄酮）萃取而使之分离。
大孔树脂法
此法可用于总黄酮的纯化，如将水溶液通过大孔树脂柱，先用水洗，再用不同浓度的乙醇分别洗脱，在某种浓度的乙醇洗脱液中含有黄酮类。如将银杏叶提取液通过一种大孔树脂，用水洗，再用25%乙醇洗脱、70%乙醇洗脱，在70%乙醇洗脱液中有银杏总黄酮。
柱色谱法及液滴逆流色谱法
包括硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）、C18填料、氧化铝等。其中氧化铝极少用。柱色谱法是分离单体的有效方法，根据填料粒度，可采用常压色谱、低压、中压色谱以及高效（高压）液相色谱法。
液滴逆流色谱法（DCCC）一般多用于苷等极性成分分离。
含黄酮类化合物中药实例
槐花米
槐花米简称槐米，所含主要成分为芦丁，又称为芸香苷，即槲皮素3-O-芸香糖苷，槲皮素为5，7，3′，4′-四OH黄酮。
芦丁溶解度在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇中1:60，沸甲醇中1:7，可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
芦丁分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定；暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性溶液中加热提取芦丁时，往往加入少量硼砂。有7-OH、4′-OH，酸性强，可用于提取。芦丁可溶于沸水（1：200），微溶于冷水（1：10000）此性质可用于提取与精制。
芦丁的提取方法，此法简称碱提酸沉法，可用于生产。需注意的是碱提时，碱性一定不可太强（pH8～9），如pH太高，则结构有可能降解，而使收率降低，甚至结构完全破坏。
芦丁的另一种提取方法是沸水提取法，即取槐米粗粉加10倍热水煮沸20～30分钟，过滤，再加水煮1～2次，合并几次煮提液，冷却放置数小时后即可析出芦丁粗品，过滤，用水重结晶一次，可得水精制品芦丁，再用甲醇重结晶一次，可得纯度更高的芦丁。
