1、取培养至对数生长后期(一般培养12～16小时)的含待提质粒的细菌培养液于离心杯中，配平，4℃下4000rpm离心15min，弃上清，然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。
2、向盛有细菌沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ，重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ，用干净的玻璃棒搅拌均匀后，再加剩下的部分)。
3、加入40mL冰冷的新配制的溶液Ⅱ，盖紧瓶盖，缓缓地颠倒离心数次，使离心管内溶物充分混匀。此步需注意：混匀过程不可用力过猛，否则容易导致基因组DNA污染。正确的方法是：缓缓地颠倒离心管数次或双手持管使其轴线水平，并使管沿轴线旋转，直到内容物粘稠有“拉丝”为止。
详细的方法步骤可以登陆生物帮了解一下，
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