如果需要从天然产物中分离纯化某一种蛋白质用于其功能研究，在分离纯化过程中需要注意哪些问题？

Question

如何评价所采用的分离纯化手段是否合理？

Answer 1

功能研究，最重要的就是活性了。
首先，要有一种简便快速的测活方法，以便随时检测活力。
其次，全程注意防止变性失活。一般是保持低温操作。
所用方法一般尽量采用基于不同原理的分离手段，以便适于不同阶段需求，除去各种不同性质的杂质。初期多采用适于大体积样品的方法，如沉淀法等。这样可以快速减少体积，便于后期层析、电泳等操作。后期一般采用高分辨率的方法，以除去性质相近的杂质。
方法好坏一般用活力回收和纯化倍数来评价，二者有一个平衡，具体与实验对于最终纯度的要求、材料来源等都有关系。比如，样品廉价易得，就优先考虑提纯倍数；样品珍贵，就要多考虑活力回收。