一、 Western blot灰度值计算实操详解</
1.1 Image J灰度分析</
二、数据采集与条带测量</
在条带选择上,如图13,红色箭头标记的矩形、椭圆或不规则选框,我倾向于使用矩形框选,便于测量。测量印记灰度值时,选取对应条带,通过快捷键Ctrl+M或菜单“Analyze”>“Measure”,确保使用同一框进行测量,如图14。
2.2-2.4步骤中,测量得到的数据和条带信息如图15所示,IntDen即为光密度数值,之后记得保存数据,如图16和图17。
三、GraphPad统计分析与图表制作</
在Excel中预处理数据,以target protein和β-Actin的灰度值为基础,计算相对表达,如图18所示。接着,使用GraphPad,选择“Column”,创建数据表格,如图19。
在新建的表格中,如图20所示,为表格命名并整理数据,确保时间和内容清晰,数据按要求粘贴并进行统计分析,如图21和图22。
3.6步骤,非配对t test设置如图23所示,理解P值和星标的重要性,用于图表解释,如图24。
完成数据分析后,选择合适的图表类型,如图25,根据差异调整误差线。图26展示默认图表样式。
3.9.1-3.9.3部分,对图表进行美化,如删除多余标题、调整Y轴起始值和颜色,如图27、图28和图30。
四、导出与结束语</
最后,通过菜单“Export”导出你的图表,如图32所示,确保设置好输出格式、像素大小和命名等参数,如图33。记住,每一步都要细心操作,感谢你的阅读与实践,愿你的科研之路顺利,如图33所示的格言提醒我们,感恩遇到,释怀错过。