HE染色操作步骤及相关问题原因

Question

如题所述

Answer 1

实验艺术：在分子层次上揭示生命的秘密，DNA的磷酸基团的负电性使其与苏木精这种碱性染料紧密相合，赋予细胞核深邃的蓝色调，而胞浆则被曙红Y染成鲜明的红色。染料对不同组织成分的亲和力，揭示了组织的结构之美。

必备工具：</从苏木精（160120）的醇溶液，到无水乙醇、硫酸铝、碘酸钠、冰醋酸，每一步都至关重要。更有伊红（160613）等，它们在配制中的精确比例成就了染色的完美呈现。

试剂配制与步骤：</首先，将苏木素（由苏木精、乙醇、硫酸铝、碘酸钠和冰醋酸混合）和伊红（曙红Y与冰醋酸调和）精心调制。操作流程如下：1. 甲醛四重奏</，定格生命的瞬间；2. PBS洗刷</，去除杂质；3. 苏木素入心</，染色细胞核；4. 水洗与分化</，区分内外；5. 伊红上阵</，胞浆显形；6. 洗涤如丝</，清晰呈现；7. 甘油如诗</，保护色彩；8. 脱水透亮</，封存记忆。

对成果的期待是细胞核与胞浆的鲜明对比，如同蓝宝石与红宝石般耀眼。但染色过程并非无瑕，每一步都需要精准的把控。

问题与对策</:1. 白斑</？温度调控或延长处理时间是关键，具体措施请参阅相关指南。
2. 核苍白</？可能是染色时间不够或氧化问题，调整时间并重新染色是良策。
3. 核过染</？时间过长或切片过厚，调整步骤或薄切以优化。
4. 色彩变异</？检查染液是否氧化，及时更换并确保充分蓝化。
5. 伊红失色</？过高的pH值或残留蓝化液需调整，彻底清洗是解药。
6. 细胞质困扰</？适当稀释染液，均匀脱水以解决问题。
7. 蓝黑色沉淀</？金属膜干扰？过滤染液或使用半氧化苏木精，让色彩纯净。
8. 水珠困扰</？确保完全脱水，移除多余的封固剂，再行处理。
9. 难聚焦</？检查封片技术，确保盖玻片的紧密贴合。
10. 回缩的困境</？调整盖玻片的压力，保持稳定的封固状态。

最后的修复艺术</:如果遇到乳白色混浊，更换乙醇，重新脱水是解决方案。核灰蓝的问题，可能需要在冷却凝固后重新包埋，确保固定和脱水过程的准确性。

偶遇挑战</:HE染色不规则可能是设备问题或固定剂进入，尝试用甲苯替换。而强嗜碱性可能是组织处理后的变性，无法逆转。裸核改变则提示切片处理中的细节疏忽，需重新处理并保持湿润。