66问答网
所有问题
用dh5α转化重组质粒时,热激温度没有控制好,达到了44度,对转化效果有多大影响?
如题所述
举报该问题
其他回答
第1个回答 2012-09-27
影响的不是转化效率或者质粒, 而是细菌本身的生存能力。细菌长时间在这个温度下会受抑制甚至死亡,但如果时间不很长,应该能活下来一些的,看你运气了。祝好运!
第2个回答 2012-09-26
问题应该不大,热激温度会影响一些转化效率,但是你转的是质粒,效率应该足够了。
一般质粒用37℃直接孵育都能转出来的。
追问
质粒做载体来连接的,这种情况呢?
追答
都这个点了,明天看结果吧:)
本回答被提问者和网友采纳
相似回答
转化
感受态细胞时
热激
后冷却时间长 会有怎样
影响
答:
蓝白筛选的原理:质粒如pUC18上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸(N端),而大肠杆菌的lac-突变型
DH5α
可编码β-半乳糖苷酶的C端,单独表达这两个片段均无β-半乳糖苷酶活性,同时表达两个片段可融和(α互补)形成具有酶活性。
影响
感受态细胞
转化
效率的因素有哪些
答:
3.经 cacl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);4.化合物及无机离子的影响:在 ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如 mn2+或 co2+)、 dmso 或还原剂等物质处理细菌,可使转化...
1.将之前已经构建好载体的
DH5α
活化提取
质粒
2.
转化
至BL21后筛选 ,请问...
答:
活化就是将冻存的菌液,在对应抗性(视具体质粒而定)的平板上划线,待菌落长起来后挑取单菌落,摇起来后再提质粒。转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟,然后将5 ul质粒加入感受态细胞,放在冰上20分钟。再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟,然后迅速放回冰中静置3-5分钟。之后将感受态...
...我想问一个问题,我将一个目的基因连接到
质粒
上 我想将这个质粒连同...
答:
能。实际上大家正是这么做的。将一个目的基因连接到质粒上,一般用两种DNA内切酶做双酶切,使目的基因和被切开的质粒片段两端都有特异性的粘性末端,然后用DNA连接酶把目的基因与质粒片段连起来。然后将
重组质粒转化
进感受态的细菌细胞中去(一般
用热激
法)。由于选用的质粒上一般带有某种抗生素抗性基因(...
我从国外要回的
质粒,有
谁知道下一步该怎么处理扩增啊?请写具体一点,试 ...
答:
这个时候一般是先制备感受态的大肠杆菌,一般是用CaCl2处理,现在也有商品化的感受态,一般菌株为
DH5α
。具体制备方法搜一下“感受态细胞制备”就有。然后一般取50-100ng质粒加入100ul的感受态细胞里,进行热激处理,这个操作方法网上也有,一般是感受态细胞(-70°C取出才有这一步)冰上融化,加入
质粒,
42...
2020-08-24
质粒
构建
答:
还有一种情况,当只扩增一种目的基因时,也可以使用Specific Primer(PCR时的下游引物)作为反转录引物。 操作步骤 步骤简述如下:按照下图中1配制溶液,然后65℃处理后加入3中所配制溶液继续后续反应即可。 连接产物的转化 常用的感受态细胞有DH5α、BL21(DE3)、Rossetta等,而抽提质粒一般
用DH5α,
可以自己制备也可以...
大家正在搜
重组质粒的转化
重组质粒转化感受态细胞
重组质粒转化方法
重组质粒转化米曲霉
重组质粒转化修复
温度与摄氏度的转化
质粒之间的转化
质粒转化怎么做
质粒转化