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质粒DNA提取和转化实验报告
哺乳动物细胞蛋白表达纯化服务
实验报告
案例
答:
DNA
胶纯化试剂盒、
质粒
小提试剂盒AXYGEN公司Agarose上海基因公司 中性红碧云天生物公司其它试剂均为国产分析纯 二、主要
实验
仪器 仪器名称 公司 仪器名称 公司 仪器名称 公司 Allegra 21R 台式高速冷冻离心机美国BECKMAN公司台式高速离心机德国SORVAL公司Mini Protean II垂直平板电泳系统、Gel Doc2000成像...
双荧光素酶
报告
基因
实验
中的
质粒
怎么找
答:
(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。(2)设计引物用PCR法从基因组
DNA
中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶
报告
基因
质粒
(pGL3-basic)中。(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。是检测启动子的荧光报告载体,当然是将miR的启动子序列构建上去。
荧光素酶
报告
基因的技术流程是什么?
答:
启动子的预测 转录因子的预测
报告
基因
质粒
的构建
实验
方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组
DNA
中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子...
荧光素酶
报告
基因的应用原理
答:
荧光素酶报告基因
实验
(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。其原理简述如下:(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。(2) 将要检测的转录因子表达
质粒与报告
基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。
分子生物学进展
答:
1938年Weaver在写给洛克菲勒基金会的
报告
中,首次使用了分子生物学(molecular biology)一词。他写道:“在...1944年:Avery提供了在细菌的
转化
中,携带遗传信息的是
DNA
,而不是蛋白质的证据。
实验
证明,使无毒的R型...Berg、Boyer和Cohen等创建了DNA克隆化技术,在体外构建成具有生物学功能的细菌
质粒
,开创了基因工程新纪元...
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文)
答:
1.3 pGBKT7.ps3和t~alrr7.T质粒的制备用2 mL LB液体培养基扩增pGBKT7一p53和pGADT7一T质 粒。分别用小规模碱裂解法【7 (AIK法)和QtarREP Miniprep Kit试剂盒(QIAGEN法)
提取质粒
。紫外分 光光度法测0D260/280,并计算
质粒DNA
含量。1.4 酵母双杂交共
转化实验
按酵母操作手册 建议的方法...
荧光素酶
报告
基因的应用原理
答:
荧光素酶报告基因
实验
(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。其原理简述如下:(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。(2) 将要检测的转录因子表达
质粒与报告
基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如...
荧光素酶
报告
基因应用原理
答:
荧光素酶
报告
基因
实验
是生物学研究中,用于评估转录因子调控效应的一种关键技术。转录因子,作为基因表达的调控者,其独特的结构使其能够与特定的
DNA
序列,即顺式作用元件,发生结合,从而影响基因的开关调控。其应用原理主要分为三个步骤:首先,设计一个构建,将目标启动子的特定部分插入到荧光素酶编码序列...
酵母单杂交方法分析转录激活活性的原理和过程
答:
再将文库
质粒转化
入
报告
株;若存在文库蛋白与目的基因的相互作用,可通过对报告基因的表达将文库蛋白的基因筛选出来.2 酵母单杂交技术的应用 酵母单杂交技术是建立在许多真核转录因子在结构和功能上是由独立的
DNA
结合结构域和DNA激活结构域组成的基础上,这使得研究者可以构建不同的基因融合体,在酵母中表达...
如何证明某个基因受转录因子的直接调控,简述
实验
设计
答:
某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合。(2) 将要检测的转录因子表达
质粒与报告
基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系,转录因子的
DNA
结合域和顺式作用元件实现共价结合。其原理简述如下,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比,产生荧光 ...
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