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怎么提高质粒DNA纯度
检测核酸
纯度
方法
答:
尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法。试剂与仪器: 提取的
质粒DNA
,紫外分光光度仪。操作步骤:1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。2...
DNA
绝对定量要
怎么
进行?
答:
拷贝数计算根据下面就可以,很简单的。拷贝数=(质量÷分子量)×6.0e+23。每个碱基的平均分子量是324.5,
质粒
的分子量是324.5*3560*2=2310440,10μg质粒的摩尔数是10/2310440/1000000=4.328e-12,一摩尔等于6.023e+23,则10μg质粒有4.328e-12*6.023e+23=2.607e+12拷贝。一对碱基...
蓝-白斑筛选影响转化率的重要因素
答:
质粒
载体的分子量越大,转化效率越低。操作细节:感受态细胞的制备至关重要,通常未经处理的细胞对重组DNA不敏感。整个操作必须在无菌条件下进行,以防止杂菌和杂质DNA污染。使用新且高压灭菌的器皿和试剂,以确保转化的高效进行。重组DNA浓度与
纯度
:转化体系中,重组
DNA的
浓度和纯度影响转化率。在一定范围内...
只有处于感受态状态下的细胞,外源
DNA
才能进入细胞内?
答:
(1)
质粒DNA的
质量和浓度,环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍,则会使转化率下降;ml左右,且注意防止被其它试剂。(应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同),大于30kb的重组质粒将很难进行转化:所用的CaCl2等试剂均需是最高
纯度
的。对TG1菌株。所有的试剂都...
sanger加减法核酸序列分析的原理
答:
用小量制备的
质粒DNA
来测定未知序列的DNA克隆,往往因为有污染而并不可取。高
纯度
的质粒最好采用氯化铯-溴乙锭梯度平衡超速离心法制备。其次是应采用高质量的聚合酶。一次末端终止反应亦可能读出300核苷酸序列。 (二)引物 酶法测序反应中都有一个与模板链特定序列互补的寡核苷酸作为DNA合成的引物。不管是单链DNA作...
质粒DNA
的限制性内切酶酶切分析哪里会有介绍?生物方面知识在哪里可以...
答:
限制性核酸内切酶:是一类能识别双链
DNA
分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。上世纪七十年代,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时,首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II,以及来源于流感...
求助:关于PCR的问题
答:
对标本的
纯度
要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,
DNA
粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。 PCR扩增产物分析 PCR产物是否为特异性扩增 ,其结果是否准确可靠,必须对其进行严格的分析与鉴定,才能得出正确的结论。PCR产物的分析,可依据...
如何
将
DNA
植入载体中?(说得好的能
提高
悬赏^-^)
答:
都是用一种方法,限制性内切酶法。整个过程的原理相同:1.从供体中制备高
纯度
的染色体基因组
DNA
;2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再...
请问加减法测定
DNA
序列时是
怎么
从放射自显影的图谱上读出序列的?_百度...
答:
用小量制备的
质粒DNA
来测定未知序列的DNA克隆,往往因为有污染而并不可取。高
纯度
的质粒最好采用氯化铯-溴乙锭梯度平衡超速离心法制备。其次是应采用高质量的聚合酶。一次末端终止反应亦可能读出300核苷酸序列。 (二)引物 酶法测序反应中都有一个与模板链特定序列互补的寡核苷酸作为DNA合成的引物。不管是单链DNA作...
DNA
主要反映遗传物质的化学组成
怎么
理解?
答:
为了得到纯的核酸可用蛋白酶除去蛋白,用RNA酶除去RNA,得到纯的
DNA
,用DNA酶除去DNA而获得RNA。目前开发了许多商品化的核酸分离柱,可简单、快速地分离得到
纯度
很高的DNA或RNA。其分离原理有的利用核酸的分子量差异,有的利用需分离核酸的特点与其特异性结合达到分离、回收的目的。 (一)
质粒
的分离与纯化 含质粒的E. ...
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