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如何提高质粒dna纯度
影响本实验结果的因素有哪些
质粒dna
的小量制备?
答:
影响质粒制备的因素:1、
质粒DNA
来源:不同细菌资源的质粒DNA在提取和纯化过程中可能存在差异,这会直接影响制备结果。2、细胞密度:高细胞密度可能会影响质粒DNA的产量和
纯度
,因为这可能导致DNA的降解、损伤或剪切。3、溶液pH值:溶液pH值对质粒DNA的稳定性和溶解性有很大影响,其选取应根据实验所需而定...
质粒DNA
提取和细胞基因组DNA提取的异同
答:
以确保
纯度
。复杂程度:
质粒DNA
提取较为简单,通常通过沸水浴和碱裂解完成,过程清晰明了;而细胞基因组DNA提取过程冗长,涉及多个步骤和条件选择,如革兰氏阳性细菌的特殊处理。相同点:无论质粒还是细胞基因组DNA,两者提取的核心目标都是去除RNA、蛋白质和其他杂质,以确保最终产物的纯度。
什么情况下需对提取的
质粒
进行纯化
答:
在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高
纯度
、高浓度的
质粒DNA
,为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。另外,碱法提取的质粒DNA即使用RNA酶处理,仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA制品时,则需进行进一步纯化。一般常用Sepharose...
质粒DNA
纯化的试验原理
答:
对于高拷贝数质粒,用少量制备法抽提
质粒DNA
就有足够量可用于基因操作。 最近已得到改进(R.Treisman,个人通讯)并达到较高境界, 使用该方法可得到极高
纯度
的质粒。聚乙二醇分级沉淀法与氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法有一点不同,那就是不能有效地把带切口的环状分子同闭环质粒DNA分开,因此, 纯化容易...
质粒DNA
提取方法比较时,需不需要进行双酶切或者单酶切,为什么?_百度知...
答:
如果是比较不同的
质粒
提取方法,我觉得实验是这样设计的。用同样来源的菌,经过同样的培养方式,然后用不同的方式进行质粒的提取。提取完了之后,要对提取的产物进行比较,比较器浓度,
纯度
等。比较浓度可以用nanodrop或者分光光度计就可以了。比较纯度就需要鉴定提取的产物,这里单酶切双酶切都没关系,...
污染物的存在
如何
影响使用OD260读数的
质粒DNA
浓度?
答:
3. 校正和空白:在进行测量时,进行校正和空白对照,以准确估算DNA浓度。4. 使用其他方法:考虑使用其他方法,如荧光测定或凝胶电泳,来更准确地测量DNA浓度和
纯度
。总之,污染物的存在可能会影响使用OD260读数来测量
质粒DNA
浓度的准确性。因此,在实验中应小心处理样品,采取适当的措施来减小污染物的影响...
质粒DNA
电泳有何特点?为什么?
答:
质粒DNA
电泳特点:DNA显色带条数:质粒DNA电泳有3条带;而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。因为:基因组DNA电泳一般是1条带,虽然在你抽提过程中也会发生断裂,形成几十至几百kb的大片段。但是我们一般用1%的胶,无法区分不同大小的DNA,所以看起来像是一条带。如果配成0.6%的胶再加lamda ...
大提
质粒
中加入PEG后为什么几乎看不到沉淀
答:
一个是提取的
质粒纯度
不高。里面含有降解的酶。可以用酚抽两次。另一个,你的RNaseA是否经过处理,最好是煮一下,灭活一下
DNA
酶。以下是RNA酶的配制方法。或者直接订购现成的。(制备不含DNase的RNase:将RNaseA溶解在0.01M的醋酸钠(pH5.2)中,使终浓度为10mg/ml,加热到100℃,15min,在室温下...
怎样
提取
质粒
?
答:
剩余的便是
质粒DNA
,可用洗脱液洗脱下来。③碱变性裂解法,细菌悬浮液在高碱性条件下,染色体和蛋白质变性,质粒DNA由于其超螺旋共价闭合结构,双链不会分离,再以PH4.8的高盐缓冲液调节其PH至中性,质粒DNA可再度复性,其速度比染色体DNA复性快,重新溶于溶液,进一步除去蛋白质等杂质可再
提高纯度
。
如何提高质粒
转化率
答:
细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好,可通过监测培养液的OD600来控制。DH5α菌株的OD600 为0.5 时,细胞密度在5×107 个/ml 左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。2. 质粒的质量和浓度: 用于转化的
质粒DNA
应主要是超螺旋态DNA(cccDNA)。转化效率与...
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